FITC标记刀豆蛋白A

产品描述

刀豆蛋白A（Concanavalin A，Con A），来源于Canavalia ensiformis洋刀豆（刀豆），是一种凝集素蛋白（Mw 104kDa）。pH≥7.0条件下，Con A以同质四聚体结构形式存在，由四个分子量为26kDa的亚基构成。酸性条件（pH 4.5-5.5）下，Con A解离为活化的二聚体结构（52kDa）。每一个单体，不管pH值或分子结构如何，都包含2个金属离子结合位点。金属离子（Ca2+ 和 Mn2+ ）必须结合到这两个位点上Con A才能发挥活性。乙酰化、琥珀酰化或其他衍生物也能产生稳定的二聚体结构形式。

刀豆蛋白A（Concanavalin A，Con A）无血型特异性，但选择性结合发现于各种糖蛋白、糖脂和糖类分子上的α-甘露糖基（α-mannosyl residues）和α-葡糖基残基（α-glucosyl residues），需要Ca2+ 和 Mn2+ 离子存在才能显示活性。Con A适用于碳水化合物研究，糖蛋白纯化，酶标记（enzyme tagging），细胞膜研究，细胞凝集，和细胞分型研究。

本品是FITC标记的刀豆蛋白（FITC labeled Concanavalin A, FITC-ConA），Ex/Em=495/515nm，亲和纯化所得，基本不含未标记的荧光素。建议工作浓度范围是5-20μg/ml。

产品特性

1）   英文同义名：Concanavalin A from Canavalia ensiformis (Jack bean), FITC Conjugate; FITC-ConA;

FITC labeled Concanavalin A (ConA); ConA lectin (FITC);

2）   中文同义名：刀豆蛋白 A 来源于洋刀豆 （刀豆），FITC标记；FITC标记的刀豆凝集素A；FITC标记的刀豆球蛋白A；FITC标记的伴刀豆球蛋白A；

3）   糖类特异性：α-甘露糖；α-葡萄糖；

4）   F/P（摩尔）：2.0-5.0

5）   外观：溶液（溶于10 mM HEPES, 0.15 M NaCl, pH 7.5, containing 0.1 mM Ca2+, 0.08% sodium azide and 0.01mM Mn2+）

6）   蛋白浓度：5mg/ml

7）   Ex/Em：495/515nm

8）   应用：IF、糖生物学

保存与运输方法

保存：2-8℃避光保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   本品置于2-8℃长期保存可能会产生沉淀，使用前请37℃温育数分钟，之后离心吸取上清使用。此操作基本不会对产生性能造成负影响。

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

常见问题Q&A

Q1: FITC标记刀豆蛋白（FITC-ConA）的建议工作浓度是多少？ 如何配制染色工作液？

回复：本品用于免疫荧光染色（IF）的建议工作浓度是5-20μg/ml，用户可根据自身的实际需求或参考文献来进行工作浓度的优化。可用生理缓冲液如PBS，HEPES等稀释到工作浓度。

Q2: FITC标记刀豆蛋白（FITC-ConA）进行免疫荧光染色（IF）的建议孵育条件如何？

回复：一般孵育条件是室温（RT）孵育30min，也可于4℃孵育30-1h。具体的孵育条件请根据自身的实际需求或参考文献来进行优化。

Q3:能拍到绿色荧光，细胞膜被染上了，我们还是想知道里面的结晶杂质是什么?

回复：如何在显微镜下判断是“结晶”？

当FITC-Con A溶液中出现结晶时，在显微镜下通常会观察到以下特征，可以与常见的聚集或沉淀物区分开：

· 形态规则判断： 结晶通常具有非常规则、锐利的几何形状。常见的形态可能包括：

· 针状/棒状晶体？

· 菱形晶体？

· 片状晶体？

· 其他对称的多面体结构？

· 高对比度边界： 晶体的边缘在明场或相差显微镜下看起来非常清晰、锐利。

· 双折射现象（关键特征）： 这是判断晶体最有力的证据之一。很多晶体在偏光显微镜下会显示出双折射特性，即在黑暗背景下发出亮白的光。如果你的显微镜配有偏光附件，可以很容易地观察到这一现象。蛋白质晶体通常具有这种特性。

· 荧光分布： 在荧光通道下，这些晶体结构可能会显示出不均匀的荧光，或者只在边缘有荧光，内部可能因为蛋白质分子排列紧密而导致FITC荧光淬灭，显得较暗。

注意区分：

· 非晶态沉淀/聚集： 看起来是无定形的、棉絮状的、边缘模糊的团块，没有规则的几何形状。

· 微生物污染： 形态通常是球状（细菌）或丝状（霉菌），并且可能会繁殖、移动。

Q4. 为什么FITC-Con A会结晶析出？

刀豆蛋白A本身就是一个易于结晶的蛋白质，这是其固有的物理化学性质决定的。结晶过程通常需要以下条件：

a. 过饱和状态：这是结晶的驱动力。当蛋白质浓度过高时，分子彼此碰撞的机会增加，更容易排列成有序的晶体结构。

· 原因：样品蒸发、配制时浓度计算错误、反复冻融导致水分减少等。

b. 合适的沉淀剂/盐条件： 溶液中的盐离子（如NaCl, (NH₄)₂SO₄）或PEG等物质会与蛋白质竞争水分子，使蛋白质“脱水”，从而更容易相互靠近并结晶。您的储存缓冲液或实验缓冲液可能正好提供了这样的条件。

c. pH值：蛋白质在等电点（pI）附近时，净电荷为零，溶解度最低，也最容易发生聚集和结晶。Con A的pI在5.5-7.0之间，如果您的缓冲液pH值在此范围内，风险会增加。

d. 温度：低温（如4°C储存）通常会降低蛋白质的溶解度，是诱导结晶的常用手段。但温度波动（反复从冰箱取出放回）也可能诱发结晶。

e. 机械扰动：剧烈的涡旋、搅拌或反复冻融可能会引入晶核，加速结晶过程。

Q5:对我的实验有影响吗？有没有办法去除掉它？

回复：会!

1. 浓度不准确与定量失效，

2. 染色不均匀与假阳性/假阴性，

3. 背景荧光增高

4. 活性可能受损。

处理流程：

a. 回温与溶解：将试剂从4°C冰箱取出，在室温下静置一段时间，或用手心温和加热，并轻轻摇晃，尝试让晶体溶解。切勿涡旋，以免产生气泡和剪切力损伤蛋白。

b. 视觉检查：对着光仔细观察溶液是否已变得清亮透明，没有任何可见的颗粒或絮状物。

c. 离心：进行高速离心（例如，12,000-14,000 g，10-15分钟），将所有不溶物（包括可能未完全溶解的微晶核）沉淀到管底。

d. 取上清：小心地打开管盖，用移液器只吸取最上层的澄清上清液用于实验。务必注意不要触碰到管底的任何沉淀。

e. 分装与储存：将处理后的上清液分装成小份，并按照说明书建议的条件储存，避免反复冻融。

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