Rhodamine-WGA 罗丹明标记麦胚凝集素

产品描述

麦胚凝集素（Wheat Germ Agglutinin，WGA）是广泛应用于细胞生物学的凝集素之一。WGA识别的糖类受体是N-乙酰葡糖胺（GlcNAc），倾向与N-乙酰葡糖胺的二聚体和三聚体结合。WGA能结合含N-乙酰葡糖胺末端或壳二糖的寡糖，这类结构在许多血清和膜来源糖蛋白中普遍存在。细菌细胞壁肽聚糖、甲壳素（几丁质）、软骨糖胺聚糖和糖脂也能结合WGA。天然WGA还能通过N-乙酰神经氨酸（唾液酸）残基与一些糖蛋白相互作用。WGA适用于胰岛素受体的纯化、血清蛋白和神经示踪。

麦胚凝集素（Wheat Germ Agglutinin，WGA）通常用来标记糖蛋白，用于活细胞或固定细胞的质膜成像，用于组织切片染色或其它标准的免疫分析实验。WGA能用作一种革兰氏染色剂，荧光标记革兰氏阳性菌（非革兰氏阴性菌）。还能用于结合出芽酵母（比如酿酒酵母）的出芽痕。

本品是罗丹明标记的麦胚凝集素（Rhodamine labeled Wheat Germ Agglutinin, Rhodamine-WGA），Ex/Em= 550/575nm，亲和纯化所得，基本不含未标记的荧光素。建议工作浓度范围是5-20μg/ml。

产品特性

1）英文同义名：Wheat Germ Agglutinin, Rhodamine Conjugate; Rhodamine labeled Wheat Germ Agglutinin; Wheat germ agglutinin lectin, Rhodamine Conjugate; Rhodamine labeled WGA Lectin;

2） 中文同义名：麦胚凝集素，罗丹明标记；罗丹明标记的麦胚凝集素；罗丹明标记的小麦胚芽凝集素；

3） 糖类特异性：N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）抑制和/或洗脱糖类：400mM N-乙酰葡糖胺

4） 外观：溶液（溶于10 mM HEPES, 0.15 M NaCl, pH 7.5, containing 0.1 mM Ca2+, 0.08% sodium azide）

5） 蛋白浓度：5mg/ml

6） Ex/Em：550/575nm

7） 荧光颜色：红色

8） 应用：IF、糖生物学

保存与运输方法：2-8℃避光保存，至少1年有效。 运输：冰袋运输。

质膜标记操作流程

一、标记活的真核细胞

以下是对贴壁培养在盖玻片上的活细胞的通用染色步骤。以下步骤使用HBSS溶液对哺乳动物细胞进行优化染色。根据不同的模型系统和预期效果来优化染色时间和浓度。

1.1 制备染色工作液：用HBSS（无酚红）稀释TRITC-WGA（5mg/ml）到工作浓度，常用工作浓度范围为5-20μg/ml。使用细胞培养基稀释WGA偶联物用于标记可能导致增高的非细胞染色背景。

1.2 细胞标记：加入足量的染色工作液完全覆盖盖玻片上的细胞。37℃孵育10min。

1.3 细胞清洗：标记结束后，吸走染色工作液，用合适的缓冲液清洗细胞2次。除非细胞要做固定，此时即可在预热的HBSS或其它适合于成像的缓冲液中封片。

1.4 【可选】细胞固定：可能用4%多聚甲醛固定染色好的细胞，37℃ 15min，之后用缓冲液清洗，以及做另一种复染。如有必要用0.2% Triton X-100透化细胞。

二、标记固定的真核细胞

以下是对贴壁培养、甲醛固定且未做透化处理细胞的通用染色步骤。根据不同的模型系统和预期效果来优化染色时间和浓度。

2.1细胞固定 :4%多聚甲醛固定细胞，37℃处理 15min。

2.2 细胞清洗：用 HBSS（不含酚红）清洗细胞三次。不要透化细胞。

2.3 准备染色工作液 :用 HBSS（无酚红）稀释 TRITC-WGA（5mg/ml）到工作浓度，常用工作浓度范围为5-20μg/ml。使用细胞培养基稀释 WGA 偶联物用于标记可能导致增高的非细胞染色背景。

2.4 细胞标记:加入足量的染色工作液完全覆盖盖玻片上的细胞。室温孵育 10min。

2.5 细胞清洗:标记结束后，吸走染色工作液，用合适的缓冲液清洗细胞 2 次。此时可能用 0.2% Triton X-100或其它表面活性剂透化细胞，进行接下来的复染或抗体标记。

2.6 细胞成像:按照实验需求用另一复染剂染色，之后在缓冲液内封片或抗荧光淬灭剂来封片。

注意事项

1） 本品置于2-8℃长期保存可能会产生沉淀，使用前请37℃温育数分钟，之后离心吸取上清使用。此操作基本不会对产生性能造成负影响。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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