FITC-MAL I;荧光素标记怀槐凝集素(MAL I)

产品简介

FITC-MAL I;荧光素标记怀槐凝集素(MAL I)Maackia Amurensis Lectin I (MAL I), Fluorescein是广泛应用于细胞生物学的凝集素之一。MAL I识别的糖类受体是核心靶点Galβ1-4GlcNAc（N - 乙酰乳糖胺，LacNAc），倾向与含 α2-3 唾液酸的 N - 连接糖链（Siaα2-3Galβ1-4GlcNAc）结合。不结合半乳糖6位α2-6唾液酸修饰、无唾液酸LacNAc、O -连接糖链，200 mM 乳糖（Lactose）可完全抑制结合。是糖生物学与免疫荧光研究的经典探针之一。

FITC-MAL I;荧光素标记怀槐凝集素(MAL I)通常用来标记糖蛋白，用于活细胞或固定细胞的质膜成像，用于组织切片染色或其它标准的免疫分析实验。

主要应用场景

免疫荧光（IF）：细胞 / 组织切片中定位 α2-3 唾液酸化 N - 糖链（如肿瘤、炎症标志物）

流式细胞术（FCM）：分析细胞表面唾液酸化糖蛋白表达

糖印迹（Glyco-blot）：检测电泳分离的糖蛋白 / 糖脂

细胞分选：标记并分离α2-3 唾液酸阳性细胞亚群

本品是FITC标记的怀槐凝集素（FITC labeled Maackia Amurensis Lectin I, MAL I），Ex/Em=495/515nm（绿色荧光），亲和纯化所得，基本不含未标记的荧光素。建议工作浓度范围是5-20μg/ml。

产品组成

保存及运输：:2-8℃避光保存，至少1年有效。 运输：冰袋运输。

产品特性

1） 英文同义名：Maackia Amurensis Lectin I (MAL I), FITC Conjugate; Fluorescein labeled Maackia Amurensis Lectin I (MAL I); , FITC-MAL I; FITC-MAL I;

2） 中文同义名：怀槐凝集素，FITC标记怀槐凝集素；FITC标记的山槐凝集素 I；荧光素标记的山槐凝集素 I；

3） 糖类特异性：含 α2-3 唾液酸的 N - 连接糖链（Siaα2-3Galβ1-4GlcNAc）

4） 外观：溶液（溶于10 mM HEPES, 0.15 M NaCl, pH 7.5, containing 0.1 mM Ca2+, 0.08% sodium azide）

5） 蛋白浓度：2mg/ml

6） Ex/Em：495/515nm

7） 荧光颜色：绿色

8） 应用：IF、FCM、糖生物学

使用方法

质膜标记操作流程：细胞中定位 α2-3 唾液酸化 N - 糖链（如肿瘤、炎症标志物）

一、标记活的真核细胞

以下是对贴壁培养在盖玻片上的活细胞的通用染色步骤。以下步骤使用HBSS（含钙镁，无酚红）溶液对哺乳动物细胞进行优化染色。根据不同的模型系统和预期效果来优化染色时间和浓度。

1.1 制备染色工作液：用HBSS（含钙镁，无酚红）稀释FITC-MAL I（2mg/ml）到工作浓度，常用工作浓度范围为5-20μg/ml。使用细胞培养基稀释MAL I偶联物用于标记可能导致增高的非细胞染色背景。

1.2 细胞标记：加入足量的染色工作液完全覆盖盖玻片上的细胞。37℃孵育10min。

1.3 细胞清洗：标记结束后，吸走染色工作液，用合适的缓冲液清洗细胞2次。除非细胞要做固定，此时即可在预热的HBSS或其它适合于成像的缓冲液中封片。

1.4 【可选】细胞固定：可能用4%多聚甲醛固定染色好的细胞，37℃15min，之后用缓冲液清洗，以及做另一种复染。如有必要用0.2% Triton X-100透化细胞。【注】4% 多聚甲醛固定10–15 min即可，避免固定过度，破坏糖链表位。

二、标记固定的真核细胞

以下是对贴壁培养、甲醛固定且未做透化处理细胞的通用染色步骤。根据不同的模型系统和预期效果来优化染色时间和浓度。

2.1细胞固定 :4%多聚甲醛固定细胞，37℃处理 15min。

2.2 细胞清洗：用 HBSS（含钙镁，无酚红）清洗细胞三次。不要透化细胞。

2.3 准备染色工作液 :用 HBSS（含钙镁，无酚红）稀释 FITC-MAL I（2mg/ml）到工作浓度，常用工作浓度范围为5-20μg/ml。使用细胞培养基稀释MAL I 偶联物用于标记可能导致增高的非细胞染色背景。

2.4 细胞标记:加入足量的染色工作液完全覆盖盖玻片上的细胞。室温孵育 10min。

2.5 细胞清洗:标记结束后，吸走染色工作液，用合适的缓冲液清洗细胞 2 次。此时可能用 0.2% Triton X-100或其它表面活性剂透化细胞，进行接下来的复染或抗体标记。

2.6 细胞成像:按照实验需求用另一复染剂染色，之后在缓冲液内封片或抗荧光淬灭剂来封片。

三、组织水平糖基化分布、病理组织（肿瘤 / 炎症）糖链标志物检测

针对冰冻切片（推荐，糖链保存更佳）

3.1切片室温复温 15 min，TBST-Ca²⁺洗 3×3 min；

3.2 用4%多聚甲醛固定10 min，洗涤；

3.3封闭液室温封闭 40 min；

3.4滴加15μg/mL FITC-MAL I，室温避光孵育 1 h；

3.5对照切片：替换为「乳糖抑制工作液」；

3.6充分洗涤、DAPI 染核、封片、镜检。

针对石蜡切片

需常规脱蜡至水，抗原修复禁用高温高压（糖链易降解），推荐室温酶修复；后续封闭、凝集素孵育步骤同冰冻切片。

四、流式细胞术（定量细胞表面 α2-3 唾液酸 N - 糖链）

适用场景：细胞群糖基化水平定量分析、细胞亚群分群、药物处理前后表达差异统计

4.1细胞收集消化 / 离心收集悬浮细胞，预冷 PBS 洗涤，调整细胞浓度至 (1×10⁶) 个/mL。

【注】消化液避免含高浓度 EDTA。

4.2重悬与封闭取100μL细胞悬液，加入等体积封闭液，室温封闭20 min。

标记（避光）分组设置：

实验组：加入FITC-MAL I，终浓度10μg/mL，室温避光孵育 30 min；

阴性对照 1（乳糖阻断）：凝集素 + 200 mM 乳糖；

阴性对照 2（空白细胞）：不加凝集素，仅缓冲液。

4.3洗涤预冷 TBST-Ca²⁺ 离心洗涤 2 次，去除游离荧光探针。

4.4上机检测重悬细胞，流式细胞仪检测 FITC 通道，分析平均荧光强度（MFI）。

五、凝集素印迹（Lectin Blot，检测蛋白糖基化）

适用场景：蛋白样本中α2-3唾液酸化N-糖蛋白鉴定、Western blot联合糖基化分析

5.1 蛋白样品经 SDS-PAGE电泳，转膜至NC/PVDF膜；

5.2 转膜完成后，TBST-Ca²⁺洗膜3×5 min；

5.3 封闭：5% BSA-TBST-Ca²⁺室温封闭1 h；

5.4 孵育探针：加入15μg/mL FITC-MAL I，室温避光摇床孵育1.5 h；

5.5 对照膜条：使用含200 mM乳糖的凝集素工作液孵育；

5.6 TBST-Ca²⁺充分洗膜 4~5 次；

5.7 荧光成像系统扫描，采集 FITC 荧光信号。

补充：后续可联用（印迹条带可再进行常规抗体孵育，实现蛋白 + 糖基化双重检测）。

六、必设对照体系（实验数据可信核心）

乳糖抑制对照（金标准）：200 mM 乳糖预处理 / 共孵育，MAL I 特异性结合应完全消失；

空白对照：不加 MAL I，仅缓冲液，排除自发荧光；

MAL II 平行对照：区分 α2-3 唾液酸 N - 糖链 / O - 糖链；

钙离子缺失对照：缓冲液替换为含EDTA的TBST，验证结合的钙依赖性。

七、常见问题排查与优化

无荧光信号

原因：缓冲液含EDTA/EGTA、Ca²⁺缺失、固定过度、凝集素失效；

优化：更换标准TBST-Ca²，缩短固定时间，重新分装凝集素。

背景荧光极高

原因：封闭不充分、洗涤次数不足、凝集素浓度过高；

优化：延长封闭时间、增加洗涤次数、降低 MAL I 浓度至 5 μg/mL。

荧光快速淬灭

优化：全程避光，使用抗淬灭封片剂，镜检缩短曝光时间。

非特异性结合多

优化：严格设置乳糖阻断对照，提高 Tween-20 浓度至 0.1%。

注意事项

1）本品置于2-8℃长期保存可能会产生沉淀，建议使用前请37℃温育数分钟，之后离心吸取上清使用，能够有效降低非特异性的背景染色。此操作基本不会对产生性能造成负影响。

2）4% 多聚甲醛固定10–15 min即可，避免固定过度，破坏糖链表位

3）切勿使用EDTA/EGTA等螯合剂，会螯合Ca²⁺导致结合完全失效。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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