细胞膜荧光探针推荐选购指南
细胞膜荧光探针 (Probes for cell membrane) 细胞膜探针分 4 大类：亲脂碳菁类（DiI/DiO/DiD）、苯乙烯类（FM 系列）、凝集素标记（WGA）、共价 / 聚集诱导 AIE 膜探针；部分还可感知膜流动性膜电位敏感型膜电位探针（DiBAC4 (3) 等。产生荧光信号。有DiI，DiO，DiD，DiR，DiA，Celltracker CM-DiI。
关键选型要点
仅做活细胞静态轮廓成像
不同的荧光染色（DiI橙色荧光；DiO绿色荧光；DiD红色荧光；DiR深红色荧光；DiA(发射光谱非常广，可被绿色，橙色，甚至是红色滤片检测到)，Celltracker CM-DiI）为活细胞多标、流式分析提供了便利：
1）DiO和DiI可分别用标准的FITC滤光片和TRITC滤光片检测。
2）DiD是DiI的衍生物，具有明显往红光迁移的激发和发射光谱，可以被633 nm He-Ne激光激发，并且具有比DiI更长的激发和发射光波长，这一特性使其特别适合标记具显著自荧光效应的细胞或组织。
3）DiR具强效的近红外光穿透细胞或组织，并在近红外区具较低的自荧光水平，这些特性使其特适用于体内成像或示踪实验。
4) DiA 为亲脂性氨基苯乙烯基染料（dialkylaminostyryl dye），扩散进入细胞膜（比 DiO 扩散速度快），常用于神经元的示踪。最显著的特点就是能与 DiI（DiIC18(3)）联合使用进行双色标记。DiA 能用于甲醛固定组织染色，研究发现某些情况下当 DiO 不能标记固定组织时，DiA 可得到良好标记。DiA 水溶液中的荧光非常弱，但与磷脂双层膜结合后，光谱迁移荧光明显加强。因其发射光谱非常广，可被绿色，橙色，甚至是红色滤片检测到.
5) CM‑DiI 优于普通 DiI；普通 DiI 会发生细胞间染料转移，造成假阳性。
双色：DiO+DiD；红色：DiI；远红：DiD，DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织，DiI比DiO荧光更亮；DiD，DiR波长更长，更适合组织染色；（根据您的需求选择相应的探针）
推荐工作浓度：1‑5 μM，37 ℃孵育 5‑15 min，洗去多余染料，立刻成像；避免长时间孵育减少内化。
研究内吞、膜动态过程 → FM1-43、FM1-43FX、FM4‑64、FM4‑64FX 首选苯乙烯类（FM 系列）
低温（4 ℃）孵育只标记质膜；升温后追踪内吞入囊泡全过程；不能固定，必须活细胞实时拍。
染色后要做免疫荧光（固定 + 通透）
同比脂溶性 DiI/DiO/DiD：只能 PFA 固定，严禁 Triton‑X100 通透，会把染料溶出；可以用皂苷温和通透。
优先选：WGA‑Alexa（凝集素）；不结合脂质，结合细胞膜表面糖蛋白 / 糖脂的糖链。
WGA（麦胚凝集素）蛋白，可以特异性识别细胞膜表面N‑乙酰葡糖胺、唾液酸残基。
WGA 蛋白偶联 Alexa 荧光基团；孵育后特异性吸附在细胞外表面糖被层。
属于蛋白‑糖的非共价特异性识别。详见我司整理常用荧光标记的凝集素（Lectin）举例及应用场景。
✅优点：PFA 固定、皂苷温和通透都耐受；适合固定样本免疫荧光。
⚠️缺点：不是标记磷脂膜；不同细胞糖基化水平不一样，染色强度不均；Triton 高浓度会破坏膜糖蛋白，信号下降。
选购列表：
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荧光颜色 |
探针名称 |
Ex/Em(nm) |
优点 & 缺点 |
适用场景 |
固定 / 通透兼容性 |
产品货号 |
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PKH-67 |
490/502 |
亮度高；易形成染料聚集体、染色后必须去除游离染料 |
体外细胞摄取、共聚焦；不推荐 NTA / 单颗粒流式 |
PFA 可固定，透化后信号大幅丢失 |
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PKH-26 |
551/567 |
同上，信号更稳定；染料颗粒干扰严重 |
同上，体外示踪，动物体内慎用 |
PFA 可固定，透化后信号大幅丢失 |
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DiO(DiOC18(3)) |
484/501 |
花菁类，比 PKH 聚集略轻；仍存在游离染料转移风险 |
体外共聚焦、活细胞成像 |
PFA 固定，忌 Triton 通透 |
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DiI(DiIC18(3)) |
549/565 |
亲脂插入膜，光稳定性一般 |
体外示踪 |
PFA 可固定；Triton 通透会被洗掉；甲醇固定不可用 |
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CM-DiI |
551/567 |
DiI + 氯甲基，可与胞内巯基共价交联仍会发生少量膜间转移；价格更高 |
细胞移植、长期细胞示踪、子代细胞标记 |
PFA 固定可用；忌 Triton 通透 |
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DiD(DiIC18(5)) |
644/665 |
远红，避开细胞自发荧光 |
体外、小动物近红外成像 |
PFA 固定，忌 Triton 通透 |
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DiR(DiIC18(7)) |
750/780 |
近红外，体内动物示踪金标准；游离染料清除难度大 |
活体小动物生物分布 |
活细胞为主，固定信号下降 |
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DiA |
456 / 590（膜内）；甲醇中 491/613 |
膜内扩散快；适合神经示踪；可与 DiI 双色标记；发射光谱极宽，串色严重；不适合体内长时示踪；浓度过高易胞内渗漏；DMSO 助溶 |
神经元示踪、原代细胞双色标记、固定样本膜成像、离体组织切片 |
PFA 可固定；禁止甲醇固定，忌 Triton 通透 |
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FM1-43FX |
470/580 |
极易内化，成像窗口很短 |
突触囊泡、内吞过程活细胞成像 |
PFA 可固定；Triton 通透会被洗掉；甲醇固定不可用 |
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FM1-43 |
470/580 |
极易内化，成像窗口很短 |
突触囊泡、内吞过程活细胞成像 |
不可固定;Triton 通透会被洗掉 |
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FM4-64 |
558/734 |
苯乙烯染料，水相淬灭；仅插入膜后发光；可追踪内吞泡 |
孵育> 5-10 min 快速内化；只能活细胞短时成像 |
不可固定;Triton 通透会被洗掉 |
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558/734 |
膜探针，内吞示踪；染料易渗漏 |
体外，不适合长时间示踪 |
PFA 可固定；Triton 通透会被洗掉；甲醇固定不可用 |
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