FM 4-64FX 膜染色剂

产品简介

  FM 4-64，英文全名：N-(3-Triethylammoniumpropyl)-4-(6-(4-(Diethylamino) Phenyl) Hexatrienyl) Pyridinium Dibromide，中文全名：（N-(3-三乙基铵丙基)-4-(6-(4-(二乙氨基)苯基)己三烯基)吡啶二溴化物）是一种亲脂的苯乙烯染料，用作一种活细胞探针示踪酵母整体膜内在化和运输到液泡。FM 4-64是一种灵敏的液泡动力学分析探针，检测一系列相关事件，包括有丝分裂中的分离结构形成、液泡分裂和融合事件，以及液泡蛋白质分拣蛋白突变体在不同阶段的液泡形态。FM 4-64具水溶性、对细胞无毒性，在水溶液中基本无荧光，一旦插入脂膜表面发出强烈的长波长红色荧光。FM 4-64与呈绿色荧光的FM 1-43（FS1376）在合适的滤片下能够区分开，允许双色实时观察膜的再循环。

FM 4-64FX是可固定的FM 4-64（FS1377）类似物，FM 4-64 只能用于活细胞染色；FM 4-64 FX活细胞染色后，兼容醛类固定。（比如：多聚甲醛或戊二醛）。

产品特性

1）分子式：C₃₅H₄₅N₄O₆F₉

2） 分子量：788.75

3） 纯度：≥90%（HPLC）

4） 外观：固体 

5） 溶解性：溶于水、DMSO

6） Ex/Em：565/744nm（in MeOH）（见附录I）

7） 化学结构式：

保存与运输方法：-20°C避光干燥保存，至少1年有效。 冰袋运输。

使用方法

储存液配制

于实验前，将冻干粉置于室温回温至少20min，加入无菌水或DMSO配制成5mM或其他浓度储存液，比如，对于100μg FM 4-64FX（Mw: 788.75）加入25.3μl DMSO，充分溶解后即得到5mM储存液，根据单次用量分装。需注意，FM 4-64FX的储存液相对于FM4-64来说不稳定，请置于≤-20℃冻存，于2周内使用，避免反复冻融。

染色方法（仅作参考）

【注意】：

1）以下以爬片生长的贴壁活细胞的质膜染色为例，仅作参考。最佳的染色条件根据使用细胞特征进行调整。

2）由于FM 4-64FX快速被内吞，很有必要参考下方的温度和时间指导来减慢内吞，提高质膜的选择性标记和成像。内吞很可能在染色的10min内发生。

3）以下步骤推荐使用不含钙镁的HBSS（FSH041-500ML）。钙镁的存在明显会加速染料内吞，导致质膜选择性染色很弱。

4）用提前冰浴的HBSS缓冲液来稀释储存液到所需的工作浓度比如8μM。

5）将盖玻片从培养基内取出，快速的浸入含足量FM 4-64FX的染色工作液，冰上孵育1min。质膜能被快速染色。

6）将盖玻片从染色工作液中取出，置于载玻片上封片，周围用石蜡密封，置于冰上，立即成像。

参考文献

 使用方法（Uptake of FM4-64FX）：

Microscopic analysis of FM4-64FX uptake was carried out as previously described [5] with slight modifications. Briefly, exponentially growing promastigotes (5×106 cells) were incubated 10 min in the dark at 27°C in complete HOMEM medium with 10μg/mL FM4-64FX. After incubation, 1 mL of cold PBS was added to stop up-take. Cells were fixed with cold 2% paraformaldehyde solution in PBS at 4°C during 5 min. Cells were resuspended in 100 μL PBS with 10μg/mL Hoechst 33342 and imaged immediately on poly-lysine coated slide.

Fig 2. Deletion of FAZ7B results in delayed incorporation of the membrane marker FM4-64FX into the flagellar pocket and altered flagellar pocket segregation. (A) Microphotographs representative of the flagellar pocket labelling with FM4-64FX (red) in the parental and FAZ7B KO cell lines. DNA was stained with DAPI (blue). Scale bar: 5 μm. (B) Quantification of FM4-64FX labelling in the flagellar pocket in 1N1K parental and FAZ7B KO cell lines; mean values ± SD of three independent experiments. ** p < 0.01 (Student’s t-test).

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