Dil(DilC18(3)) 细胞膜橙红色荧光探针

产品简介

Dil, DiO, DiD和 DiR作为一类长链的亲脂性二烷基碳菁类染料（Dialkylcarbocyanines）荧光染料家族，用于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构。作为一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。一旦进入细胞后，它们在细胞内质膜中逐步扩散，于最佳浓度条件下可将整个细胞均匀染色。这些染料具很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。四种染料呈现不同的荧光颜色，Dil（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光），为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和Dil分别用标准FITC和TRITC滤光器检测，可结合使用。DiD可被633 nm 氦-氖（He-Ne）激光激发，具有比Dil更长的激发和发射光波长，特别适合用于标记具本底荧光的细胞和组织。而，DiR在体内活体成像或者示踪中意义非凡，因其所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织，并且在红外光范围内，其本底荧光水平很低。

本品以Dil的高氯酸盐形式提供，适用于荧光检测研究。

基本特性

CAS：41085-99-8

同义名：Dil perchlorate，1,1'-DIOCTADECYL-3,3,3',3'-TETRAMETHYLINDOCARBOCYANINE PERCHLORATE

分子式：C₅₉H₉₇ClN₂O₄

分子量：933.87g/mol

纯度：≥98%

Ex/Em：505/567 nm（inphosphate buffer/SDS pH7.0）

外观：红色至暗红色，紫色至深紫色粉末

溶解性：溶于 DMF，DMSO，甲醇

储存条件：-20℃干燥保存，1年有效。

推荐滤光器：Omega-XF108, XF32, Chroma-41002, 31002

使用方法【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

1. 染色液制备

1）储存液制备：用 DMSO或乙醇配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取5mg Dil（Mw：933.87 g/mol）

溶于1.07ml 无水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，

避免反复冻融，且要避光保存。

2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作 浓度。【注意】工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范 围为区间进行最优浓度的摸索。

2. 悬浮细胞染色 

1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106 /mL。

2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。

4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5）再重复3），4）步骤两次。

3. 贴壁细胞染色

1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2）从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。

3）在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。

2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

a) Dil和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) Dil和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) Dil，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005；

4.显微镜检测

附表 DiD，DiO，DiI，DiR和DiA光谱特征汇表

5. 流式细胞仪检测

经DiO，Dil，DiD和DiR染色的细胞分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。

注意事项

（1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

（2）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。