DiA 细胞膜绿色荧光探针

产品简介

   DiA 为亲脂性氨基苯乙烯基染料（dialkylaminostyryl dye），扩散进入细胞膜（比 DiO 扩散速度快），常用于神经元的示踪。最显著的特点就是能与 DiI（DiIC18(3)）联合使用进行双色标记。DiA 能用于甲醛固定组织染色，研究发现某些情况下当 DiO 不能标记固定组织时，DiA 可得到良好标记。DiA 水溶液中的荧光非常弱，但与磷脂双层膜结合后，光谱迁移荧光明显加强。因其发射光谱非常广，可被绿色，橙色，甚至是红色滤片检测到（见下图 DiA 与膜结合后的荧光激发和发射光谱图）。

本品以DiA的碘盐形式提供，适用于荧光检测研究。

产品特性

同义名：4-Di-16-ASP; 4-(4-(Dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide;

化学名：Benzoxazolium, 3-octadecyl-2-[3-(3-octadecyl-2(3H)-benzoxazolylidene)-1-propenyl]-, perchlorate

分子式：C₄₆H₇₉IN₂

分子量：787.04 g/mol

纯度：≥95%

Ex/Em：491/613 nm（甲醇）

外观：红色固体

溶解性：溶于乙醇，DMSO，甲醇

储存条件：-20℃干燥保存，1年有效。

使用方法【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

1.染色液制备

储存液制备：用 DMSO或乙醇配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取25mg DiA（Mw：787.04 g/mol） 溶于6.35ml 无水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃， 避免反复冻融，且要避光保存。

工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作浓度。【注意】工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。

2.悬浮细胞染色

1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×10⁶/mL。

2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。

4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5）再重复3），4）步骤两次。

3.贴壁细胞染色

将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。

在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。

附表 DiD，DiO，DiI，DiR和DiA光谱特征汇表

注意事项

（1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

（2）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。