DiIC12(3)高氯酸盐细胞膜荧光探针

产品简介

DiIC12(3)高氯酸盐(英文名：DiIC12(3)perchlorate）橙红色荧光、亲脂性碳菁染料-DiIC12(3)，是DiI (DiIC18(3))（Cat#：FS1190-10MG）的短链类似物，能比DiI更轻易插入细胞膜。在水中呈弱荧光，一旦插入膜后发强荧光且光相对稳定。脂质环境中具极其高消光系数和短激发态寿命（~1ns）。一旦加入细胞中，染料横向扩散进入质膜。DiIC12(3)是一种亲脂性神经元示踪剂，通常用于标记神经元项目以及其它细胞（特别是内皮细胞）的脂质双分子层。

产品特性

CAS NO：75664-01-6

化学名：3H-Indolium, 1-dodecyl-2-(3-(1-dodecyl-1,3-dihydro-3,3-dimethyl-2H-indol-2-ylidene)-1-propenyl)- 3,3-dimethyl-, perchlorate

同义名：1,1’-Didodecyl-3,3,3’,3’-tetramethylindocarbocyanine perchlorate 1,1′-二(十二烷基)-3,3,3′,3′-四甲基吲哚碳菁高氯酸盐

分子式：C₄₇H₇₃N₂O₄Cl

分子量：765.55

纯度：≥95%（HPLC）

外观：固体

溶解性：溶于DMSO

Ex/Em：549/565nm（in DMSO）

储存条件：-20℃干燥保存，1年有效。

推荐滤光器：Omega-XF108, XF32, Chroma-41002, 31002

使用方法(以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整)。

染色液制备

1）储存液制备：用 DMSO或乙醇配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取25mg DiIC12(3)（Mw：765.55 g/mol）溶于6.53ml DMSO或乙醇中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。

2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作浓度。【注意】工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。

悬浮细胞染色

1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。

2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。

4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5）再重复3），4）步骤两次。

贴壁细胞染色

1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2）从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。

3）在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。

多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

a) Dil和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) Dil和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) Dil，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005；

4.显微镜检测

附表 DiD，DiO，DiI，DiR和DiA光谱特征汇表

5. 流式细胞仪检测

经DiO，Dil，DiD和DiR染色的细胞分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。