二抗（Secondary antibody）、标记二抗选择指南

发布日期：2026/8/8 18:28:29

﹄二抗（Secondary antibody）、标记二抗选择指南﹃

背景介绍

二抗（Secondary antibody）也称第二抗体，是指能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体（如IgG、IgM或IgA等）均具有反应性。
一抗 vs 二抗的区别：

一抗：直接去找样品中你要检测的靶蛋白（抗原），和靶蛋白结合。可以理解成找目标蛋白的 “侦察兵”
二抗：不去找靶蛋白，专门结合已经粘在靶蛋白上的一抗。二抗上连有标记（酶、荧光），用来产生可检测的信号，还能放大信号。可以理解成：专门抓住侦察兵，身上带着 “信号灯”，把信号放大显示出来。

实验流程：靶蛋白抗原 ➜ 结合一抗 ➜ 再结合二抗 ➜ 显色 / 发光 / 荧光，看到结果。

项目	一抗（Primary）	二抗（Secondary）
识别对象	样本靶抗原（蛋白 / 多肽）	一抗（IgG）恒定区
来源选择	看靶蛋白	看一抗的宿主物种
标记	可标记，多数不标记	几乎都带标记（酶 / 荧光 / 生物素）
优缺点	直标的一抗，信号弱、成本贵	可以搭配很多种同物种一抗，性价比高，信号更强。
作用	特异性识别靶标	信号放大 + 显色 / 发光 / 荧光检测
孵育顺序	第一步孵育	第二步孵育

关键选择要点

✅种属必须匹配一抗宿主：一抗是小鼠，二抗必须抗小鼠；⚠️不匹配完全不结合，实验无条带 / 无信号。
举例：一抗是小鼠来源，则二抗选山羊抗小鼠 IgG；一抗是兔来源，则选山羊抗兔 IgG。
✅双荧光共标实验：两个一抗来自不同物种；二抗要选第三种宿主（如驴源二抗），⚠️避免二抗之间互相识别造成背景高。

片段选择
①完整 IgG：即二抗后缀写 IgG (H+L)，代表同时识别 IgG 的重链 (H) 和轻链 (L)，结合效率更高，普通实验首选，也是绝大多数实验用。
②消除轻重链干扰(IP专用二抗)：HRP标记轻链特异性二抗(消除重链干扰) Light‑chain specific（LCS）和HRP标记重链特异性(消除轻链干扰)二抗 Heavy‑chain specific（HCS / Fc‑fragment specific）
③F (ab')₂片段：去除 Fc 段，避免样本 Fc 受体非特异结合，降低背景。

常用标记物与适用实验
HRP 辣根过氧化物酶：WB、ELISA、IHC；化学发光、底物显色，实验室最常用。
AP 碱性磷酸酶：WB、ELISA、IHC。
荧光标记（FITC、Cy3、AF488、AF594、PE）：免疫荧光 IF、ICC、流式 FC，显微镜直接看荧光。
Biotin 生物素：配合链霉亲和素系统，信号进一步放大，多用于 IHC。
消除轻重链干扰：WB、IP

复申生物FUSHENBIO提供多种标记及物种请根据看说明确认是否适配你的实验选购列表如下：

识别物种：Mouse小鼠
二抗名称	偶联标记物	产品对应货号
Goat Anti-Mouse IgG (H+L) 山羊抗小鼠	HRP、AP、Biotin、FITC、Alexa Fluor 488、Cy3、TRITC、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 680、Alexa Fluor 790、DyLight 405、DyLight 680、DyLight 800、Alexa Fluor 555、PE	FSM0056、FSM0057、FSM0058、FSM0059、FSM0060、FSM0061、FSM0062、FSM0063、FSM0064、FSM0065、FSM0066、FSM0067、FSM0135、FSM0137、FSM0170、FSM0202
Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) 驴抗小鼠	HRP、AP、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 647、DyLight 405	FSM0101、FSM0102、FSM0103、FSM0104、FSM0105、FSM0106
Goat Anti-Mouse IgM, µ Chain Specific 山羊抗小鼠IgM，µ链特异结合	HRP、FITC	FSM0068、FSM0069
AffiniPure F(ab')2 Fragment Goat Anti-Mouse IgG (H+L) F(ab)'2片段	Alexa Fluor 488、PE	FSM0123、FSM0124
Goat Anti-Mouse IgG, Light Chain Specific山羊抗小鼠轻链二抗（消除重链干扰）	HRP	FSM0139
Goat Anti-Mouse IgG, Heavy Chain山羊抗小鼠重链二抗（消除轻链干扰）	HRP	FSM0141
Highly Cross-Adsorbed Goat Anti-Mouse IgG (H&L) 高度交叉纯化	HRP	FSM0185
识别物种：Rat大鼠
Goat Anti-Rat IgG (H+L) 山羊抗大鼠	HRP、AP、Biotin、FITC、Cy3、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 594、Texas Red	FSM0070、FSM0071、FSM0072、FSM0073、FSM0074、FSM0154、FSM0159、FSM0179、FSM0195
Donkey Anti-Rat IgG (H+L) 驴抗大鼠	Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 594、TRITC、Alexa Fluor 647	FSM0107、FSM0108、FSM0131、FSM0178
AffiniPure F(ab')2 Fragment Goat Anti-Rat IgG (H+L) F(ab)'2片段	Alexa Fluor 488、PE	FSM0125、FSM0126
识别物种：Rabbit兔
Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) 山羊抗兔	HRP、AP、Biotin、FITC、Alexa Fluor 488、Cy3、TRITC、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 680、Alexa Fluor 790、DyLight 405、DyLight 549,DyLight 680、DyLight 800、Cy7、Cy5、Alexa Fluor 555、Texas Red、PE	FSM0075、FSM0076、FSM0077、FSM0078、FSM0079、FSM0080、FSM0081、FSM0082、FSM0083、FSM0084、FSM0085、FSM0086、FSM0134、FSM0136、FSM0138、FSM0163、FSM0167、FSM0177、FSM0194、FSM0201
Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) 驴抗兔	HRP、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 647、DyLight 405、Texas Red	FSM0118、FSM0119、FSM0120、FSM0121、FSM0122、FSM0199
Goat Anti-Rabbit IgM, µ Chain Specific 山羊抗兔IgM，µ链特异结合
AffiniPure F(ab')2 Fragment Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) F(ab)'2片段	Alexa Fluor 488、PE	FSM0127、FSM0128
Goat Anti-Rabbit IgG, Light Chain Specific小鼠抗兔轻链二抗（消除重链干扰）	HRP	FSM0140
Goat Anti-Rabbit IgG, Heavy Chain山羊抗兔重链二抗（消除轻链干扰）	HRP	FSM0142
Highly Cross-Adsorbed Goat Anti-Rabbit IgG (H&L) 高度交叉纯化	HRP	FSM0184
识别物种：Goat山羊
Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) 标记兔抗山羊	HRP、AP、Biotin、FITC、Alexa Fluor 488、Cy3、TRITC、Alexa Fluor 594、DyLight 405 、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 680	FSM0089、FSM0090、FSM0091、FSM0092、FSM0093、FSM0094、FSM0095、FSM0096、FSM0097、FSM0156、FSM0151
Donkey Anti-Goat IgG (H+L) 驴抗山羊	HRP、Biotin、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 594、DyLight 405、Alexa Fluor 647、Texas Red	FSM0111、FSM0112、FSM0113、FSM0114、FSM0115、FSM0162、FSM0200
AffiniPure F(ab')2 Fragment Donkey Anti-Goat IgG (H+L) F(ab)'2片段	Alexa Fluor 488、PE	FSM0129、FSM0130
Goat Anti-Human IgG (H+L) 山羊抗人	HRP、Alexa Fluor 680、Alexa Fluor 594 、FITC、Alexa Fluor 488、PE、APC、Texas Red	FSM0087、FSM0152、FSM0161、FSM0172、FSM0174、FSM0175、FSM0176、FSM0197
AffiniPure F(ab')2 Goat Anti-Human IgG F(ab')2 山羊抗人二抗F(ab)'2片段	FITC	FSM0173
识别物种：Guinea pig 豚鼠
Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L) 山羊抗豚鼠	HRP、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 594 、Texas Red	FSM0088、FSM0109、FSM0110、FSM0198
Rabbit Anti-Guinea Pig IgG (H+L) 兔抗豚鼠	Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 647	FSM0153、FSM0203
Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L) 驴抗豚鼠	Alexa Fluor 647	FSM0204
识别物种：Sheep 绵羊
Rabbit Anti-Sheep IgG (H+L) 兔抗绵羊	HRP、FITC、Cy3	FSM0098、FSM0099、FSM0100
识别物种：Chicken 鸡
Donkey Anti-Chicken IgY (H+L) 驴抗鸡	Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 594	FSM0116、FSM0117
Goat Anti-Chicken IgG (H+L) 山羊抗鸡二抗	FITC、HRP	FSM0143、FSM0144
AffiniPure Rabbit Anti-Chicken IgY（H+L）兔抗鸡二抗	AP	FSM0187

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