全能核酸酶

产品简介

Benzonase Nuclease 全能核酸酶也称广谱非限制性核酸酶是来自粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的基因工程核酸内切酶。 该蛋白质是一个具有两个必需的二硫键的30kDa亚基的二聚体。 该核酸内切酶切割并降解所有形式的DNA和RNA(单链，双链，线性和环状)，并且在广泛的操作条件下有效。 酶活性的最佳pH为8.0-9.2。 它将核酸完全消化为长度为3至5个碱基的5'-单磷酸端寡核苷酸。 这是从重组蛋白中去除核酸的理想方法，也适用于需要完全消化核酸的应用。 它还可以降低蛋白质提取物的粘度，防止细胞结块。 蛋白质样品的预处理通过完全去除其中的核酸，提高其在2D凝胶电泳上的分辨率。 消化天然或热变性的DNA和RNA。

该酶已用于限制嵌合细胞混合物制备过程中的细胞聚集。 它还被用于通过消化DNA和释放与DNA密切相关的核蛋白来制备核提取物。 广谱非限制性核酸酶(全能核酸酶)，或粘质沙雷氏菌内切酶，可用于降解所有形式的DNA和RNA，同时不具有蛋白水解活性。广谱内切酶也可用于微量热实验中制备蛋白质。 用于去除蛋白质样品中的核酸。

本品以无菌液体酶的形式提供，储存于缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50% Glycerol）中，无色透明液体。

产品组成

保存及运输：-20℃避光保存，至少2年有效。 运输：冰袋运输。

产品特性

来源：E. coli

分子量(Molecular Weight): 26.5 kDa

等电点: 6.85

纯度(Purity): ≥ 99%（HPLC）

酶活(Enzyme Activity):250-300 U/μL (不同批次有差异，具体参加实物标签)

比活(Specific Activity): ≥ 1.5×106 U/mg蛋白

最适pH(Optimum pH): 8.0（工作范围pH 6-10）

辅助因子(Cofactor):1-10 mM Mg²⁺ 

储存缓冲液(Storage Buffer): 20 mM Tris-HCl pH8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50% Glycerol

活性单位定义(Unit Definition): 在37℃，pH 8.0反应条件下，2.625 mL反应体系中，在30 min内使△A₂₆₀吸收值变化1.0（相当于完全消化37 μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）。

使用方法（仅供参考）

1、 样本准备

贴壁细胞：去除培养基，用PBS清洗细胞，去除上清。

悬浮细胞：离心收集细胞，用PBS清洗细胞，6,000 rpm 离心10 min，收集沉淀。

大肠杆菌：离心收集菌体，用PBS清洗1次，8,000 rpm 离心5 min，收集沉淀。

2、样品处理

   将收集到的细胞沉淀按照质量（g）与体积（mL）比1：(10~20) 的比例进行裂解处理，也可通过在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞（1 g细胞约为10⁹个）。

3、酶的添加

1）添加适量MgCl₂将反应体系中的Mg²⁺ 浓度调整在1-5 mM范围内，将pH调整成8-9。

2）按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加UltraNuclease，37℃孵育30min以上。也可以跟据上表中的推荐使用量自行选定添加方案，在一定范围内增加酶量，消化所需时间相应减少。

【注】全能核酸酶的酶活受离子浓度、反应温度及pH等因素的影响，初次使用时建议摸索最适浓度。

4、上清获取

以12,000 rpm的转速离心30min获得细胞裂解液上清，再进行后续相关实验。

【注】若溶液为高盐溶液，偏酸性或者偏碱性，含有较高浓度的去垢剂、变性剂，应适当增加酶的用量或延长孵育时间。

注意事项

1). 进行 RNA 样品操作时请在 RNase-free 管中进行加样；
2). Omni-nuclease (Benzonase) 的有效工作温度是 0~42℃，最佳工作温度是37℃。低温使用酶活性有所降低，可通过多添加 2~5 倍 Benzonase Nuclease或延长消化时间(2~3 h)来进行活力补偿；
3). 含大量蛋白、细胞壁、其它盐分的粗制品，对该酶活性有部分抑制作用，使用时需要增加酶的用量；
4). 酶活性 ≥250 U/μl，对于小体积制备物，可用稀释缓冲液 (20 mM Tris-Cl pH8.0, 2 mM MgCl₂, 2 mM NaCl) 稀释到一定浓度，再加入体系中，稀释后溶液在 4℃ 仅能保存数天；
5). 产品以液体酶形式提供，直接加入裂解液共同使用即可；
6).为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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