蛋白酶 K

产品简介

蛋白酶K，英文名Proteinase K，一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶，pH 4-12的宽广范围内均有活性，SDS、尿素或EDTA存在条件下也很稳定。相对分子量约29.3kDa，能够切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，用于生物样品内蛋白质的降解。

蛋白酶K基因来自林伯氏白色念球菌(Tritirachium album limber)，通过酵母重组表达所得，达分子生物学级别。蛋白酶K应用广泛，主要用于去除DNA和RNA制备中的核酸酶，也可用于非蛋白组分制备体系内降解蛋白质杂质，比如DNA疫苗制备、肝素制备等。还可用于制备脉冲电泳的染色体DNA和蛋白质印迹实验。本品常用工作浓度为50-100µg/ml，根据缓冲体系是否含SDS、尿素、pH、温度等因素确定具体的工作浓度。

产品优势

◇  重组蛋白酶K是突变改造的天然蛋白酶K，具有改善的比活力、更高产量和更宽广的pH/温度优化活性；

◇  大规模重组表达产物能够满足批次一致性、优越纯度和低成本的优点；

◇  重组蛋白酶K不含DNA的天然属性使其非常适用于DNA/RNA模板制备；

◇  重组蛋白酶K广泛适用于分子生物学内常见的蛋白水解和化学-酶法多肽合成，以及分子诊断和生物医药用途；

◇  重组蛋白酶K广谱的温度特征助其用于蛋白去折叠，能够轻易的打断蛋白结构；

◇  高纯度≥95%，经脱色和色谱纯化去除RNA和DNA，检测不到其它杂酶活性；

◇  高比活≥40U/mg protein；

◇  严格质控，每个批次都做残留杂酶检测，无DNase/RNase残留；

◇ 冻干粉和储存液（20mg/ml）两种形式，任君选择；

◇ 具备大规模生产能力，能够批量供货，可达公斤级；

保存及运输：保存：冻干粉+4℃密封干燥保存，一年有效；-20℃密封干燥保存，三年有效。运输：冻干粉室温运输。

产品特性

1）CAS NO：39450-01-6

2）E.C. NO：3.4.21.64

3）来源：基因来源林伯氏白色念球菌，酵母重组表达

4）纯度：≥95%，经脱色和色谱纯化去除RNA和DNA，检测不到其它杂酶活性。

5）pH范围：4.5-12.0，通常使用pH范围是7.5-9.0

6）温度特征：在70℃活性最大，建议使用温度范围37-70℃

7）比活力：≥34U/mg protein

8）单位定义：在37℃，pH7.5的条件下，每分钟水解酪蛋白生成1µM酪氨酸时需要的酶量，定义为1个活性单位。

9）激活剂：1-5mM Ca2+【为了活化蛋白酶K活性，加入1-5mM Ca2+。用激活剂优化实验条件能明显增加酶活性。当加入EDTA去除体系内Ca2+会降低酶活性。】

10）抑制剂：PMSF或DFP（酶可用DFP或PMSF失活，PMSF终浓度5mM。）

11）质量控制：a）以λ DNA为底物，37ºC消化4小时以上，未检测到脱氧核糖核酸酶活性。b）以λ DNA为底物，25ºC消化16小时以上，未检测到核糖核酸酶活性。

12）消光系数：E1%= 14.2 (280 nm, 10 mM NaCl and 5 mM CaCl2, pH 8.0)

13）稀释缓冲液：推荐 20 mM Tris-HCl (pH 7.4)，1mM CaCl2

14）储存缓冲液：20 mM Tris-HCl (pH 7.4)，1mM CaCl2，50% Glycerol

配制方法

1）先将蛋白酶K粉末溶于稀释缓冲液【20 mM Tris-HCl (pH 7.4)，1mM CaCl2】或其他缓冲液配制成40-80mg/ml原液，用0.22 µm低蛋白吸附的PES或PVDF滤膜过滤除菌。

2）加入等体积高温高压灭菌的分子生物学级甘油，混匀。

3）根据一定用量分装，置于-20℃冻存。一年有效。

注意事项

1）本蛋白酶K是现有蛋白酶中活性最高的品种，pH活性范围4-12，温度范围为0-75℃，甚至在SDS、尿素或EDTA存在的情况下依旧保持活性。

2）蛋白酶K粉末并非无菌，需要长期保存后使用或要求实验必须无菌，请务必过滤除菌处理。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。