脱氧核糖核酸酶DNase I

产品描述

脱氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，缩写DNase I，在大多数细胞和组织中都能发现的一种核酸内切酶，偏好切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物最小为多聚四核苷酸。Mg2+存在条件下，DNase I可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在条件下，DNase I识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I可水解多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）。

脱氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，缩写DNase I，最早从胰腺中分离而来，至今哺乳动物胰腺也是最主要的来源之一。DNase I以两对二硫键结合的多种糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范围是pH 7-8，DNase的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原来的1/2。

本品来自牛胰腺，色谱纯化制备，常用于去除蛋白或RNA样品中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使标记碱基插入DNA。本品以含氯化钙的冻干粉形式供应，比活≥2000Kunit Units/mg蛋白。

产品特性

CAS：9003-98-9

蛋白纯度：≥80%（biuret），色谱纯化

比活力：≥2000Kunit Units/mg protein

活力定义：25℃，pH5.0条件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分钟ΔA260增加0.001的变化定义为一个酶活力单位（Kunitz unit）。

激活剂：多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+、Ca2+、Co2+、and Zn2+

抑制剂：β-巯基乙醇；螯合剂；SDS；肌动蛋白；并没有特异性抑制DNase I酶活的通用抑制剂，比如柠檬酸盐抑制Mg2+活化的DNase I，但不能影响Mn2+激活的DNase I。

溶解性：溶于0.15M NaCl（5mg/ml），无色透明溶液

保存运输：冻干粉-20℃干燥冻存，至少3年稳定，冰袋运输。

常见问题

1. 如何溶解DNase I粉末？

将本品溶解于0.15 M NaCl溶液，可配置成5-10 mg/ml的储存液，-20℃分装冻存。需要注意：本品储存液即使-20℃分装冻存，一周可能会有＜10%活力损失；置于2-8℃，约会有20%活力损失。

2. 如何将本品活力换算成质量？

根据本品各批次的比活力和蛋白含量，比如当酶比活力为2000 Kunits/mg，蛋白含量为100%（biuret）也，那么15KU=15000Kunits/2000Kunits/mg/100%=7.5mg本品。

3. 使用多大浓度DNase I用来去除溶液内的DNA？

在含50mM Tris-HCl（pH7.5），10mM MgCl2的溶液体系内，加入20-50μg DNase I，并于37℃孵育60min以去除DNA污染。本用量仅作参考，具体实验请做适当调整。