Golgi-Tracker Red 高尔基体红色荧光探针(活细胞成像用)

产品简介

Golgi-Tracker Red是一种高尔基体红色荧光探针，是神经鞘脂(sphingolipid)类荧光探针中的一种，可以用于活细胞高尔基体特异性荧光染色。

Golgi-Tracker Red为采用BODIPY TR进行了荧光标记的C5-ceramide。Ceramide或其类似物可以选择性地和高尔基体结合，因此荧光标记的Ceramide可以用作高尔基体特异性的荧光探针。Golgi-Tracker Red可以用于活细胞的高尔基体荧光标记，但不适合用于固定细胞的标记。若需要做固定细胞的高尔基体染色，可选择NBD C6- ceramide（#FS1456-1MG）。

Golgi-Tracker Red呈红色荧光，最大激发波长为589nm，最大发射波长为617nm。（光谱特征见图 1），用Texas Red光学滤片设置来观察。Golgi-Tracker Red与同类型的NBD C6-ceramide相比较，表现出更好的抗光衰减性和更明亮的荧光，在很多应用上都能替代NBD C6-ceramide。Golgi-Tracker Red也能用于鞘脂运输和代谢研究，测定Schwann细胞合成脂类的速率，以及标记细胞轮廓以便在共聚焦显微镜下观察形态运动。本Golgi-Tracker Red探针已与BSA形成复合物。本产品所属的神经鞘脂类荧光探针与BSA形成复合物后，对活细胞高尔基体的标记会更加高效。

本试剂盒提供了Golgi-Tracker Red稀释液，使Golgi-Tracker Red的使用更加便捷。推荐的稀释比例调整范围为1:50~1:200，按照1:100的比例稀释，可以配制3ml Golgi-Tracker Red工作液；按照1:200的比例稀释，可以配制6ml Golgi-Tracker Red工作液。

产品组成

基本特性

靶点：Golgi-Tracker Green；BODIPY FL C5-Ceramide；Golgi apparatus高尔基体；Golgi-Tracker Red；高尔基体染色探针；BODIPY FL；ER-Tracker Green 内质网荧光探针；

分子量：705.71

分子式：C₃₉H₅₀BF₂N₃O₄S

纯度：≥98%

最大吸收/发射波长:589/617nm

储存及运输条件：-20ºC避光干燥保存，至少6个月有效。 冰袋运输。

使用方法（以下步骤仅做参考，具体请根据实际情况或参考文献资料来调整。）

1.1   储存液准备：本产品以33.3mg/ml（~47mM）的DMSO溶液形式提供，建议首次使用时，经低速离心将产品集中在底部，按照单次用量分装成小规格，在-20℃或-80°C避光保存，避免反复冻融。由于本身量微少，务必低速离心后再开盖，然后用低吸附枪头吸取母液，并分装-20℃冻存，避免反复冻融。

1.2  工作液准备：吸取少量Golgi-Tracker Red 储存液按照1：100的比例用Golgi-Tracker稀释液来稀释，比如：取10µl Golgi-Tracker Red 储存液加入到1ml Golgi-Tracker稀释液中，混匀后即为Golgi-TrackerRed工作液，工作液请现配现用。

【注意】：Golgi-Tracker Red的工作浓度可以根据实际情况进行适当调整，推荐的稀释比例调整范围为1:50~1:200。

1.3 染色步骤

针对细胞悬浮染色

① 悬浮细胞：经1000g离心3-5分钟，弃去上清液，使用适量的溶液如Hanks平衡盐溶液(含钙镁)[#FS0395]或其他缓冲液清洗两次，每次5分钟。

② 贴壁细胞：使用合适的缓冲液清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。

③ 使用新鲜配制的Golgi-Tracker Red染色工作液重悬细胞，4℃避光孵育30min。

④ 吸弃染色液，使用预冷的细胞培养液洗涤细胞3次左右，换新鲜培养液在37℃的条件下避光孵育30min。，

⑤ 使用新鲜培养液再洗涤一次，随后通过荧光显微镜或共聚焦显微镜进行观察。 

针对细胞贴壁染色

① 在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。

② 从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。

③ 去除细胞培养液，用适量的溶液如Hanks平衡盐溶液(含钙镁)或其他缓冲液来洗涤生长在盖玻片上的细胞。

④ 吸弃漂洗液，加入新鲜配制的Golgi-Tracker Red染色工作液，4℃避光孵育30min。

⑤ 吸弃染色液，使用预冷的细胞培养液洗涤细胞3次左右，换新鲜培养液在37℃的条件下避光孵育30min。

⑥ 使用新鲜培养液再洗涤一次，随后通过荧光显微镜或共聚焦显微镜进行观察。 

1.4显微镜检测：

染色完成后，高尔基体呈明亮的强荧光染色，而细胞内的其他膜系统呈比较微弱的荧光染色。Golgi-Tracker Red的最大激发/发射光分别为589 /617 nm。 

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3）Golgi-Tracker Red在4℃，冰浴等较低温度下会凝固而粘附在离心管官底、管壁或管盖内，可将置于25℃水浴温育片刻直至全部融解后使用。对于微量液体，每次使用前低速离心使得液体全部沉降至管底，再开盖使用。

应用示例（来自文献，仅做参考）

1）文献来源：Egelund J. et al. Arabidopsis thaliana RGXT1 and RGXT2 Encode Golgi-Localized (1,3)-α-d-Xylosyltransferases Involved in the Synthesis of Pectic Rhamnogalacturonan-II. Plant Cell. 2006; 18: 2593-2607

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