Golgi-Tracker Green 高尔基体绿色荧光探针(活细胞成像用)

产品简介

Golgi-Tracker Green是一种高尔基体绿色荧光探针，是神经鞘脂(sphingolipid)类荧光探针中的一种，可以用于活细胞高尔基体特异性荧光染色。

Golgi-Tracker Green为采用BODIPY TR进行了荧光标记的C5-ceramide。Ceramide或其类似物可以选择性地和高尔基体结合，因此荧光标记的Ceramide可以用作高尔基体特异性的荧光探针。Golgi-Tracker Green可以用于活细胞的高尔基体荧光标记，但不适合用于固定细胞的标记。若需要做固定细胞的高尔基体染色，可选择NBD C6- ceramide（#FS1456-1MG）。

Golgi-Tracker Green呈绿色荧光，最大激发波长为505nm，最大发射波长为511nm。（光谱特征见图 1），细胞标记Golgi-Tracker Green后在620nm处也可能发射红色荧光。Golgi-Tracker Green与同类型的NBD C6-ceramide相比较，表现出更好的抗光衰减性和更明亮的荧光，在很多应用上都能替代NBD C6-ceramide。Golgi-Tracker Green也能用于鞘脂运输和代谢研究，测定Schwann细胞合成脂类的速率，以及标记细胞轮廓以便在共聚焦显微镜下观察形态运动。本Golgi-Tracker Green探针已与BSA形成复合物。本产品所属的神经鞘脂类荧光探针与BSA形成复合物后，对活细胞高尔基体的标记会更加高效。

本试剂盒提供了Golgi-Tracker Green稀释液，使Golgi-Tracker Green的使用更加便捷。推荐的稀释比例调整范围为1:50~1:200，按照1:100的比例稀释，可以配制3ml Golgi-Tracker Green工作液；按照1:200的比例稀释，可以配制6ml Golgi-Tracker Green工作液。

产品组成

基本特性

靶点：Golgi-Tracker Green；BODIPY FL C5-Ceramide；Golgi apparatus高尔基体；Golgi-Tracker Red；高尔基体染色探针；BODIPY FL；ER-Tracker Green 内质网荧光探针；

分子量：601.6

分子式：C₃₄H₅₄BF₂N₃O₃  

纯度：≥98%

最大吸收/发射波长:505/511nm

储存及运输条件：-20ºC避光干燥保存，至少6个月有效。 冰袋运输。

Golgi-Tracker Green的化学结构式及激发光谱和发射光谱参考图1

使用方法（以下步骤仅做参考，具体请根据实际情况或参考文献资料来调整。）

1.1   储存液准备：本产品以33.3mg/ml（~55mM）的DMSO溶液形式提供，建议首次使用时，经低速离心将产品集中在底部，按照单次用量分装成小规格，在-20℃或-80℃避光保存，避免反复冻融。由于本身量微少，务必低速离心后再开盖，然后用低吸附枪头吸取母液，并分装-20℃冻存，避免反复冻融。

1.2  工作液准备：吸取少量Golgi-Tracker Green 储存液按照1：100的比例用Golgi-Tracker稀释液来稀释，比如：取10µl Golgi-Tracker Green 储存液加入到1ml Golgi-Tracker稀释液中，混匀后即为Golgi-Tracker Green工作液，工作液请现配现用。

【注意】：Golgi-Tracker Green的工作浓度可以根据实际情况进行适当调整，推荐的稀释比例调整范围为1:50~1:200。

1.3 染色步骤

针对细胞悬浮染色

① 悬浮细胞：经1000g离心3-5分钟，弃去上清液，使用适量的溶液如Hanks平衡盐溶液(含钙镁)[#FS0395]或其他缓冲液清洗两次，每次5分钟。

② 贴壁细胞：使用合适的缓冲液清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。

③ 使用新鲜配制的Golgi-Tracker Green染色工作液重悬细胞，4℃避光孵育30min。

④ 吸弃染色液，使用预冷的细胞培养液洗涤细胞3次左右，换新鲜培养液在37℃的条件下避光孵育30min。，

⑤ 使用新鲜培养液再洗涤一次，随后通过荧光显微镜或共聚焦显微镜进行观察。 

针对细胞贴壁染色

① 在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。

② 从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。

③ 去除细胞培养液，用适量的溶液如Hanks平衡盐溶液(含钙镁)[#FS0395]或其他缓冲液来洗涤生长在盖玻片上的细胞。

④ 吸弃漂洗液，加入新鲜配制的Golgi-Tracker Green染色工作液，4℃避光孵育30min。

⑤ 吸弃染色液，使用预冷的细胞培养液洗涤细胞3次左右，换新鲜培养液在37℃的条件下避光孵育30min。

⑥ 使用新鲜培养液再洗涤一次，随后通过荧光显微镜或共聚焦显微镜进行观察。 

1.4显微镜检测：

染色完成后，高尔基体呈明亮的强荧光染色，而细胞内的其他膜系统呈比较微弱的荧光染色。Golgi-Tracker Green的最大激发/发射光分别为505/511 nm。 

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3）Golgi-Tracker Green在4℃，冰浴等较低温度下会凝固而粘附在离心管官底、管壁或管盖内，可将置于25℃水浴温育片刻直至全部融解后使用。对于微量液体，每次使用前低速离心使得液体全部沉降至管底，再开盖使用。

应用示例（来自文献，仅做参考）

1）文献来源：Selective staining of the Golgi apparatus using the green-fluorescent BODIPY FL C5-ceramide (MX4356) (top panel). At high concentrations, the BODIPY FL fluorophore forms excimers that can be visualized using a red longpass optical filter (bottom panel). The BODIPY FL C5-ceramide accumulation in the trans-Golgi is sufficient for excimer formation J Cell Biol (1991) 113:1267).

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