SOSG，AM单线态氧绿色荧光探针（细胞可渗透）

产品简介

单线态氧可通过多种途径产生，如染料光敏化作用。在哺乳动物生物学中，单线态氧作为活性氧物种之一，与低密度脂蛋白胆固醇的氧化及其引发的心血管效应密切相关。多酚类抗氧化剂能够清除并降低活性氧浓度，可能预防此类有害氧化效应。摄入经光活化可产生单线态氧的色素会导致皮肤严重光敏反应，这一问题在草食性动物中尤为突出。此外，单线态氧被认为是光动力疗法中的关键活性物质。

本品为SOSG单线态氧绿色荧光探针（细胞可渗透）专用于检测细胞外单线态氧，具备细胞膜穿透性。该探针对单线态氧具有高度选择性，与现有其他荧光及化学发光式单线态氧检测试剂不同，其对羟基自由基（·OH）、超氧化物超氧阴离子（·O2–）和一氧化氮（NO）或其他活性氧物种(ROS)均无明显响应【见图1】。该指示剂与单线态氧（1O²）反应前，探针最初发弱蓝色荧光，激发峰在372nm和393nm，发射峰在395nm和416nm。当含单线态氧（1O²），探针发射绿色荧光，光谱特征类似于荧光素（最大激发/发射波长约504/525nm）。其工作原理是通过单线态氧反应消除PET猝灭基团，从而恢复荧光特性。如需水溶性，适合细胞外应用的可选用货号#FS1450-SOSG单线态氧绿色荧光探针（水溶性，适合细胞外应用）。

产品组成

图1、Singlet Oxygen Sensor Green (SOSG)的荧光反应和对单线态氧（1O2）的特异性。

A）用荧光光度计（Ex/Em= 488/525nm）测定溶液内的荧光，溶液内含SOSG（1 µM ）和亚甲基蓝（10 µM）溶于100mM pH 7.5 Tris Buffer; 单线态氧清除剂叠氮钠（NaN₃，1 mM）；或50% D2O（重水，能够延长1O²的寿命）。每20s完成一次荧光测定，每次测定间隔30s（如灰条标示）。在这30s的间隔中，样本暴露于激光辐射（630–680 nm，），导致亚甲基蓝光敏生成1O²。

B）用荧光光度计（Ex/Em=488/525nm）测定溶液内的荧光，溶液为50mM pH 7 Tris buffer，1mM 黄嘌呤，SOSG（1 µM），或含SOSG（1 µM），或含二氢罗丹明123。约20s之后，加入50 mU/mL黄嘌呤氧化酶（XO）。XO催化黄嘌呤的氧化，产生尿酸和超氧化物。超氧化物瞬间被H₂O₂降解。

基本特性

同义名：Singlet Oxygen Sensor Green, SOSG；SOSG, AM；单线态氧（Singlet Oxygen,1O²）；单线态氧荧光探针；; ROS（Reactive oxygen species）活性氧物质；

分子量：757.14

纯度：≥95%

外观：黄色固体

溶解性：溶于 DMSO和甲醇

激发波长/发射波长(Ex/Em)：FITC filter/FITC filter

推荐使用培养板：黑壁/透明底

储存及运输条件：-20℃干燥避光保存，至少2年有效。冰袋运输。

【注】储备液的保存方式和期限：-80℃, 6 months; -20℃, 1 month (protect from light, stored under nitrogen)。-80℃储存时，请在6个月内使用，-20℃储存时，请在1个月内使用。

使用方法

一、试剂准备

1）配制 Pluronic F-127 母液：称取 100mg Pluronic F-127 粉末（货号：Cat No. FS0432）中加入 500μl DMSO，配制成 20%(w/v) DMSO 母液。溶解过程需要在 40-50℃加热 20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2）HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3)（货号：Cat No. FSH043） 或者其他生理缓冲液

二、溶液配制

1）用无水 DMSO 溶解 SOSG, AM单线态氧绿色荧光探针（细胞可渗透） 配制成 1-5mM 的储存液，或将已配好的 SOSG, AM 储存液取出于室温回温。（如：若配制成5mM 的母液，需向 100µg SOSG, AM 中加入 26.4µl 无水 DMSO（货号：Cat No. FS0306）。

完整储备液配制表

【注①】：SOSG, AM 染色工作液制备前，添加等体积 20% Pluronic F-127 溶液到 SOSG, AM +DMSO储存液，从而使 Pluronic F-127 的最终工作浓度约为 0.04%。

【注②】：Pluronic F-127 可以防止 AM 探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但 Pluronic F-127

可降低 AM 探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议加入储存液长期保存。

2）用 HHBS 或其他生理缓冲液将 SOSG, AM+DMSO 储存液稀释到 1-10µM 的工作液。

【注①】：SOSG, AM 应用在大部分细胞的推荐加载浓度为 10µM，具体的使用浓度需根据实验要求

进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

【注②】：SOSG, AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

3）【可选】如果细胞内含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone，

0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

【注①】：丙磺舒或磺吡酮储存液相当偏碱，因此加入培养基后需要重新调整 pH。

4）将准备好的 SOSG, AM工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。37℃孵育 20min-2h。

【注①】：若使用含血清的培养基，血清内酯酶会降解 AM，从而降低 SOSG, AM 加载效果。而含酚

红培养基会使本底值略偏高，建议加入染色工作液前，对细胞清洗 2~3 次。

【注②】：关于孵育的时间，如果首次做实验不能确定，建议先孵育 30min，看荧光效果；如果细胞死

亡较多，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。

【注③】：降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

5）吸掉染色工作液，并用 HHBS 或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如 2.5mM 丙磺舒的缓冲液）清洗细胞 1~2 次，以去除残留探针。

6）室温再孵育 30min 以保证细胞内 AM 的完全去酯化。

7）用Cy5快闪光照射细胞，或延长照射至10分钟。

8）使用FITC滤片组在荧光显微镜下对细胞进行成像。

 注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）微量包装的产品定量精准，粉剂再进行分装会因为静电/产品性状等原因造成较大损失，再分装或重新称量前请斟酌！建议请直接在原包装瓶/管内按照所需加入适量的溶液配成浓储分装。

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