DHE超氧化物阴离子荧光探针，Ros原位荧光探针

产品简介

Dihydroethidium是一种最常用的超氧化物阴离子Ros原位荧光检测探针。可以直接用于活细胞的标记。Dihydroethidium被活细胞摄入后，可以在细胞内的超氧化物阴离子作用下脱氢，产生ethidium。Ethidium (例如溴化乙锭)可以和RNA或DNA结合产生红色荧光。当细胞内的超氧化物阴离子水平较高时，产生的ethidium较多，红色荧光就较强，反之则较弱。这样就可以用dihydroethidium进行超氧化物阴离子水平的检测。Dihydroethidium本身为蓝色荧光，最大激发波长为370nm，最大发射波长为420nm，脱氢后和RNA或DNA结合产生红色荧光，最大激发波长为300nm，最大发射波长为610nm，实际观察时也可以使用535nm作为激发波长。

用于细胞内超氧化物阴离子检测时，Dihydroethidium的推荐工作浓度为1-10μM。通常用含有0.5-5μM的Dihydroethidium的适当溶液和细胞一起在37℃孵育30分钟左右进行荧光探针装载，随后可以适当洗涤，接着可以直接用流式细胞仪或其它适当荧光检测仪器进行检测。

产品属性

CAS ：104821-25-2

化学名：二氢乙锭;2,7-Diamino-10-ethyl-9-phenyl-9,10-dihydrophenanthridine 3,8-Diamino-5,6-dihydro-5-ethyl-6-phenylphenanthridine Hydroethidine

分子式：C₂₁H₂₁N₃

分子量：315.41

纯度：≥98%

外观：粉剂

溶解性：溶解于DMSO，配制成适当的母液。

密度：1.1970

存储条件：-20℃避光保存，至少2年有效。

使用方法

一、Dihydroethidium 工作液的配制

1.1 制备储存液

用DMSO 配制10 mM 的Dihydroethidium。如用0.31 mL DMSO 溶解1 mg Dihydroethidium。

注：Dihydroethidium储存液建议分装后于-20℃或-80℃避光保存。

1.2 工作液的配制

用预热好的无血清细胞培养基或PBS 稀释储存液，配制成1-10 μM 的Dihydroethidium工作液。

注：请根据实际情况调整Dihydroethidium 工作液浓度，且现用现配。

二、细胞染色

2.1 悬浮细胞：离心收集细胞，加入PBS洗涤两次，每次5分钟。

贴壁细胞：弃去培养基，加入胰蛋白酶消化细胞。离心弃去上清后，加入PBS洗涤两次，每次5分钟。

2.2 加入1 mL Dihydroethidium工作液，室温孵育15-60 分钟。

2.3 400 g，4℃ 离心3-4 分钟，弃去上清。

2.4 加入PBS洗涤细胞两次，每次5分钟。

2.5 用1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后，在荧光显微镜或流式细胞仪下检测。

注意事项

1）Dihydroethidium易在空气中氧化，请尽量避免暴露于空气中。

2）Dihydroethidium脱氢后产生毒性较高的ethidium，请注意防护。

3）Dihydroethidium 储存液建议分装后于-20℃ 或-80℃ 避光保存，避免反复冻融。-20℃可保存1个月，-80℃可保存半年。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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