LysoTracker Deep Red 深红色溶酶体荧光探针

产品简介

LysoTracker®系列探针是对活细胞中的酸性区室进行选择性染色的一类荧光染料，该类探针具有几大重要的特点，1）选择性标记酸性细胞器；2）纳摩尔级（nM）浓度即可有效标记活细胞；3）具有多色探针提供，可根据情况对样品进行多标实验。LysoTracker®结构上由一个荧光基团和相连的弱碱基构成，可自由穿过细胞膜，一般聚集在球形细胞器上，适用于观察溶酶体内部生物合成及相关发病机理。Lysotracker中性pH下仅仅发生部分质子化，因此该探针标记细胞器的原理可能与其完全质子化并滞留在细胞器膜上有关。即使后续的弱碱性细胞渗透化合物处理细胞通常不会可逆化染色结果。Lysotracker探针的内吞化动力学研究显示染料进入活细胞的摄入速率仅几秒即可。然而，这些溶酶体探针会导致溶酶体被碱化，比如长期孵育会诱使溶酶体pH的增加。因此，建议成像前用探针孵育细胞的时间仅1-5min就好。

本品LysoTracker Deep Red是对活细胞中的酸性细胞器进行标记和示踪的一种深红色荧光染料，具有647/668 nm的最大激发/发射波长，使用与Cy5或MitoTracker Deep Red相同的滤片进行检测即可。本品为DMSO储存液，浓度为1mM。用于活细胞的溶酶体染色，建议工作浓度为50-75 nM，需根据实际情况做优化调整。

产品组成

基本特性

浓度：1mM in DMSO

颜色：蓝色溶液

Ex/Em：647/668 nm

外观：远红外

检测仪器：荧光显微镜、荧光成像仪、显微镜

溶解性：溶于 DMSO（1mM）

运输储存条件：冰袋运输，-20℃干燥保存，1年有效。

使用方法（以下步骤仅做参考，具体请根据实际情况或参考文献资料来调整。）

使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。

1. 工作液的配制

(1) 利用培养基或合适的缓冲液将1 mM 储存液稀释至工作浓度，推荐工作液浓度为50-75 nM；

2. 染色

2.1 对于贴壁细胞

（1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。

（2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30 min～2 h（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。

3）利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片见表1）下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

2.2 对于悬浮细胞

1）离心，吸除上清。                      

2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育30 min～2 h（具体时间需根据细胞类型而定）。

3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。

4）用装有合适滤片的荧光显微镜进行观察（见附表1）。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间，使得染料能聚集在溶酶体上。

【注】:对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经BD Cell-Tak处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。

 注意事项

（1）为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。工作液现配现用。

（2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附表1. Lysotracker&Lysosensor&DQ-BSA系列溶酶体探针的光谱总结

 详见我司整理的关于：溶酶体染色应用选购指南。