产品简介(粉剂)
Ficoll 400是由蔗糖和环氧氯丙烷共聚而成的一种高度分支化的聚合物。 Ficoll 400是完全非离子型合成蔗糖聚合物。。 由于其含有丰富的羟基,Ficoll 400具有很强的亲水性和水溶性。 Ficoll 400最常见的应用是作为密度梯度介质,用于真核细胞、细胞器和细菌细胞的分离和分离。密度范围可达1.2 g/ml。 它还被用于一系列其他应用中。
产品应用
本品用于分离人外周血淋巴细胞由FICOLL配制而成,全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的无菌条件下进行。为获得最佳的实验结果,最好在取血2h内进行实验,血液存放时间越长,细胞分离效果越差。血液放置超过6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。因血液样本的个体差异及血液粘度不同,需调整离心力及离心时间,建议离心力最大不超过1200g。
产品特点
由于高分子量和低含量的透析性材料,Ficoll对细胞膜的渗透性比蔗糖低得多。 因此,细胞在梯度Ficoll下的聚集密度要低于梯度蔗糖。Ficoll由于其低膜渗透性和低渗透压,通常能较好地保存细胞功能和形态。
外观与性状:白色粉末
熔点:300°C
溶解性:易溶于水
保存条件:室温
包装:5g 25g 100g in poly bottle
溶液制备
水的浓度可达到50% (w/v)。 Ficoll应在持续搅拌下缓慢加入。其1g溶于10ml去离子水中时呈透明到微模糊,无色到淡黄色的溶液。 Ficoll在碱性和中性溶液中稳定。当pH值低于3时,它会迅速水解,尤其是在高温下。 Ficoll可在110oC的中性pH下高压灭菌30分钟。 应避免使用强氧化性和还原性试剂。
FS1141R-100ml即用型溶液简介
保存及运输:+4~30℃避光保存,至少2年有效。本品易染菌,需无菌条件下操作,启封后置常温保存,低温存储易出现白色结晶,影响分离效果。运输:室温运输,
使用方法
1-1. 取一支15mL离心管,血液样本量为3~10mL时,应加入与血液样本等量的分离液。
1-2. 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上:
| 血液样本量 | 离心力 | 离心时间 |
| ≤3ml | 400~650g | 15~25min |
| 3~10mL | 500~950g | 20~30min |
| 10~20mL | 500~1100g | 20~30min |
【注】:根据血液样本量确定离心条件,血液样本量越多,离心力越大,离心时间越长,具体离心条件需客户自行摸索,以达到最佳分离效果。
1-3. 离心后,此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
1-4. 用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15mL离心管中,向所得离心管中加入10mL清洗液混匀细胞。
250g,离心10min。
1-5. 弃上清。
1-6. 用吸管以5mL缓冲清洗液重悬所得细胞。
1-7. 250g,离心10min。
1-8. 重复1-5、1-6、1-7,弃上清后以0.5mL后续实验所需相应液体重悬细胞。
注意事项
1)本实验最好不要使用高聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料制品,应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品,因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面,影响细胞分离效果。
2)吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。
3)吸取过多的淋巴细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。
4)当血液样本粘度过高需稀释时,最优稀释方法:将血液与样本稀释。注:不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。如血液样本经过稀释则分离过程中需适当降低离心力和离心时间。
5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。