胶原蛋白酶 来源于溶组织梭菌 Type Ⅳ,≥125 CDU/mg

英文名 Collagenase Ⅳ CAS号 9001-12-1
产品编号 FS1134 分子式 C38H56N10O10
产品分类 细胞分离与消化 分子量 812.91
纯度 ≥125 CDU/mg 储存条件 -20℃
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产品简介

  胶原酶(CollagenaseCAS NO. 9001-12-1)是一种蛋白水解酶,常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶,胶原酶特异性识别Pro-X-Gly-Pro序列(高频出现在胶原collagen,很少在其他蛋白中发现)并切割氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之间的肽键。不同于其他蛋白酶,胶原酶是唯一一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维,这种胶原纤维广泛存在结缔组织。

商业化胶原酶来源于溶组织梭菌(Clostridium histolyticum),是一种酶粗提物,不仅含有梭菌蛋白酶AClostridiopeptidase A),能够降解天然胶原和网状纤维;还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分别用以水解存在结蹄组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质等。目前商业化的胶原酶因所含组分的差异分为五类,其在应用上具有一定区分,详见附录1

本品是IV型胶原酶,活性≥125 CDU/mg冻干物,维持相对均量的多种酶活(包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性),通常用作上皮组织、肝、肺、脂肪和肾上腺组织的细胞制备。

产品特性

1EC NO3.4.24.3

2CAS NO9001-12-1

3)同义名:Clostridiopeptidase A梭状杆菌肽酶A,梭菌肽酶A

4)酶活力单位定义:在37℃pH7.4Ca2+的条件下,5h内水解牛跟腱胶原产生多肽量相当于1µmol亮氨酸茚三酮颜色变化时所需的酶量定义为1个胶原消化单位(collagen digestion unitCDU)。

保存与运输方法

保存:2-8℃干燥保存,可置于-20℃长期保存,2年有效。冰袋运输

使用方法

一、储存液制备

1)直接往100mg胶原酶内加入100µl含钙镁的HBSS缓冲液,轻轻漩涡震荡确保完全溶解混匀。

2)根据具体批次的酶活力,用含钙镁的HBSS缓冲液调整酶浓度到100U/µl1000×储存液),之后用低蛋白吸附滤膜过滤除菌。

3)立即使用或将储存液根据单次用量分装,置于-20℃避光保存。

4)使用前置于冰上融化,避免反复冻融。建议胶原酶的工作浓度范围50-200U/ml(或0.5-2.5mg/ml),具体使用浓度请根据具体消化对象或参考文献来调整。

二、组织分离

1)用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm小片,之后用含钙镁的HBSS缓冲液清洗组织片几次;

2)加足量含钙镁的HBSS缓冲液浸没组织片,之后按照50-200U/ml用量加入适量胶原酶;

337℃孵育4-18h,置于水平摇床并且孵育体系加入3mM CaCl2可提高消化效率。

4)将消化好的细胞混合物用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。

5)将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。

6)低速离心,吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞,使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。

三、器官灌注

1)将胶原酶加入37℃预热含钙镁的HBSS缓冲液,使其浓度为50-200U/ml,或根据具体实验体系调整;另加入3mM CaCl2可提高消化效率。

2)按照针对特定器官的预优化频率来进行灌注;

3)将收集到的细胞/组织混合碎片用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。

4)将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。

6)低速离心,吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞,使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。

注意事项

1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录1 1 几种胶原酶特征和应用比较

胶原酶类型

组分特征和应用

I型胶原(Type 1

相对均量的多种酶活(包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性);

通常用作上皮组织、肝、肺、脂肪和肾上腺组织的原代细胞制备。

II型胶原酶(Type 2

含更高的梭菌蛋白酶活性;

通常用作心脏、骨、肝、胸腺、唾液腺和软骨等组织的原代细胞制备。

III型胶原酶(Type 3

含较低的次级蛋白酶水解活性;常用于乳腺组织的原代细胞制备;

IV型胶原酶(Type 4

含较低的胰酶活性;通常用于胰岛细胞制备,和维持受体完整性比较重要的其他研究。

也可用于髓系细胞制备。

V型胶原酶(Type 5

部分纯化型,含更高的胶原酶和酪蛋白活性,更低胰酶水平以降低对膜蛋白和受体造成损伤。

适用于胰岛制备。

胶原酶NB(标准级别)

相对均量的多种酶活(包括胶原酶、梭菌蛋白酶、中性蛋白酶活性),作用温和。

广谱适用人和动物组织各种细胞的分离,可用作脂肪组织、软骨、皮肤、胎盘、

脐带组织和肺的原代细胞制备;也适用细胞传代,比如胚胎干细胞。

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产品货号

产品名称

产品规格

FS1131-100MG

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