高效RIPA 组织细胞裂解液 (含PMSF，1.5ml）

产品简介

 RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。

本产品是利用表面活性剂等来裂解细胞膜（包括核膜）。本试剂提取的蛋白为可溶性总蛋白。

产品组成

使用方法

※如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

根据使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，混匀备用 （PMSF现用现加）。

1）样本处理

a) 对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b) 对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 5-10×105细胞/管，然后再裂解。

c) 对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液

(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 。

用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2、后处理：

将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。 

注意事项

1.  使用本裂解液可以裂解细胞核，释放出核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液（CAT:#FS1047）煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可加入少量SDS(1%),煮沸离心测浓度。

2. 本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法（CAT:#FS1026）法检测蛋白浓度。

3. 如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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