Cholera Toxin B subunit-AF594 霍乱毒素B亚基-AF594标记橙红色荧光

产品简介

  霍乱毒素B亚单位(Cholera Toxin Subunit B，简称CTB)是霍乱肠毒素的重要组成部分，而霍乱肠毒素是霍乱弧菌分泌的主要致病因子。天然霍乱毒素采用AB5毒素结构模式，由一个具有酶活性的A亚单位和五个相同的B亚单位非共价结合形成的环状五聚体。该产品为重组形式，通过基因工程技术单独表达B亚单位，完全不含具有毒性的A亚单位，既保证了实验安全性，又不影响其功能特性。

CTB的核心功能机制在于其能够特异性识别和结合细胞膜上的GM1神经节苷脂(monosialotetrahexosylganglioside)。GM1神经节苷脂是一种广泛分布于真核细胞膜上的糖鞘脂，特别在神经元胞体、树突以及上皮细胞表面富集。CTB与GM1的结合具有高度亲和力和特异性，这种结合特性是其多种应用场景的分子基础。CTB可以在不引起细胞毒性反应的前提下，利用CTB的膜结合能力进行多种研究。

产品应用：神经元逆行示踪剂、免疫佐剂、标记细胞膜上的脂筏

CTB是公认的强效黏膜免疫佐剂。其作用机制在于：CTB结合黏膜上皮细胞表面的GM1后，能够促进共价或非共价偶联的抗原被上皮下免疫细胞（如M细胞、树突状细胞）摄取和呈递，同时诱导黏膜局部产生IL-4、IL-10等Th2型细胞因子，从而显著增强黏膜IgA抗体应答和系统性体液免疫。基于此特性，CTB已被广泛应用于口服、鼻腔或舌下途径的疫苗递送研究，能够有效提高抗原的免疫原性，且安全性优于完整的霍乱毒素（CT）。

起初CTB作为非荧光示踪剂被应用于逆行示踪技术中，荧光结合形式CTB的出现让其逐渐转变为一种常用的荧光示踪剂，本品为AF594-CTB(#FS1490)是用Alexa Fluor 594标记的,Ex/Em=590/617nm，亲和纯化所得CTB产品。此外，我们还可以定制FITC/AF488/AF594/AF647等小分子荧光素标记的CTB。

产品组成

产品特性

中文名称:荧光素标记的霍乱毒素B亚基;异硫氰酸荧光素标记的霍乱毒素B亚基；霍乱毒素B亚基-AF488;霍乱毒素B亚基-AF594;

英文名称:CHOLERA TOXIN B SUBUNIT-AF594; CTB-AF594; Cholera Toxin B subunit-AF594; CTxB-AF594; Choleragenoid-AF594

分子量：11.8kDa(还原)

形式：重组型

外观：液体

叠氮化钠：未添加

内毒素：＜0.2EU /μg

纯度：经 SDS-PAGE和RP-HPLC检测，纯度＞95%

蛋白浓度：1mg/ml

Ex/Em：590/617nm

荧光颜色：橙红色

储存及运输条件：-20℃储存，有效期1年。2-8°C 保存，有效期 1 周。避免反复冻融。

使用方法

一、脂筏标记

细胞膜脂筏的标记可以直接使用CTB-AF594（#FS1490，1mg/mL）进行标记，方法如下：

以下方案适用于对 1 个 2 mL 体系、浓度为 1×10⁶个/mL 的悬浮活细胞样本进行标记。对于在 18 mm×18 mm 盖玻片上生长至亚汇合度（70%-80%）的贴壁细胞，也可使用相同体积的试剂进行标记。若需标记多个样本，可按比例扩大试剂用量；若孵育体积小于 2 mL，可按比例减少试剂用量。

1.1、细胞洗涤：将细胞离心，用预冷的1×PBS（PH7.4）轻轻重悬细胞沉淀。

1.2、CTB孵育条件

浓度优化：CTB-AF594（#FS1490，1mg/mL）推荐工作浓度5-10μg/mL（不同细胞类型最适浓度有差异，需预实验确定，过高浓度增加背景），工作液可用无菌1×PBS稀释（PH7.4）。

孵育时间与温度：4°C孵育30分钟（减少内吞作用，保持膜表面GM1标记）。若需标记内化GM1，可改为 37°C孵育15-30分钟。孵育结束后，用预冷的1×PBS（PH7.4）轻轻洗涤细胞数次。

避光操作：CTB-AF594对光敏感，全程避光。

1.3、封片与观察标记细胞

若细胞无需用醛类固定以进行长期储存，也无需固定后用去污剂透化以进行后续标记步骤，则可直接进行此步骤；否则跳过此步骤，继续进行步骤 3.4。将细胞置于预冷的1×PBS（PH7.4）中封片，使用合适的滤光片组通过荧光显微镜观察细胞。

1.4、固定（可选）：将细胞置于含 4% 甲醛的预冷1×PBS（PH7.4）中，在 4°C 条件下固定 15 分钟，避免醛类过度交联破坏脂筏结构。甲醇/丙酮等有机溶剂固定会溶解脂筏，不可使用。若细胞无需去污剂透化，可直接进行步骤3.6。

洗涤：固定后用1×PBS（PH7.4）轻柔洗涤3次，防止脂筏破坏。

1.5、透化细胞（可选）：脂筏的标记不建议透化处理，如实验中无法避免透化，可尝试将固定后的细胞置于含 0.1% Saponin的1×PBS（PH7.4）中，在室温下透化 10 分钟。透化结束后，用 1× PBS 洗涤细胞 1 次。

1.6、封片与观察固定后的细胞：使用适宜的封片剂（如#FSM0032）对固定后的细胞（或固定并透化后的细胞）进行封片，然后使用合适的滤光片组通过荧光显微镜观察细胞。

注意事项

1）荧光染料都存在淬灭问题，操作或保存过程中尽量避光，减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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