血浆cfDNA提取试剂盒（离心柱）

【产品概述】

简石生物血清/血浆游离DNA提取试剂盒是一款专门用于从各种液态生物样本中高效提取高纯度游离DNA（cfDNA）的专用试剂盒。它采用优化的蛋白酶K消化与柱纯化技术，能够从血清、血浆、羊水及脑脊液（CSF）中有效纯化出片段化的游离DNA。所获得的DNA纯度高，适用于对DNA质量要求严苛的下游应用，如下一代测序（NGS）、qPCR等。

【核心亮点】

样本兼容性广：专为血清、血浆、羊水、脑脊液等多种液态生物样本设计，覆盖临床常见检测样本类型。

高纯度与高回收率：针对无细胞游离DNA（cfDNA）进行优化，可有效回收≥100 bp的DNA片段，去除蛋白质、酶抑制剂等杂质，获得的DNA可直接用于高灵敏度检测。

灵活的操作与上样体积：提供针对≤5 ml和5-10 ml不同样本量的两套优化操作方案，并支持离心和负压两种纯化方式，适应不同通量和设备条件的实验室需求。

流程标准化：提供清晰的试剂添加比例表（表1、表2），步骤标准化，重复性好，便于快速开展实验。

【详细产品特性】

适用样本：血清、血浆、羊水、脑脊液。

处理体积：

血浆：单次离心最多3 ml；两次离心最多10 ml。

血清：最多10 ml。

羊水/脑脊液：最多1 ml。

DNA回收范围：可有效回收≥100 bp的游离DNA片段。提取的DNA总量因个体差异较大，通常从血清或血浆中提取的DNA浓度在1-100 ng/ml之间。

DNA纯度：产量高、纯度好，可直接用于qPCR、高通量测序等分子生物学实验。

主要仪器：水浴锅或金属浴（需55℃温控）、微型离心机、负压多联器或立式离心机。

关键注意

• 试剂配制：首次使用需配制蛋白酶 K 与 SP DNA 洗涤液 2
• 温度控制：SP 消化液 / 洗涤液 1 低温易沉淀，需 37℃ 加热澄清
• 洗脱优化：使用预热洗脱液，室温静置 2-3 分钟提升回收率
• 定量方法：推荐使用 qPCR、Qubit 等高灵敏度方法，不推荐 Nanodrop

• TD476 血清 / 血浆游离 DNA 提取试剂盒 高频 FAQ（10 条核心要点）

  1. TD476 适用哪些样本？不同样本的最大处理体积是多少？

  本品适用于血清、血浆、羊水、脑脊液；血清 / 血浆单次最多处理10ml，羊水 / 脑脊液单次最多处理1ml，完美适配液体活检微量样本提取。

  2. 试剂盒针对游离 DNA 做了哪些优化？可回收片段范围是多少？

  专为游离 DNA (cfDNA) 优化设计，可稳定回收≥100bp的核心片段，精准匹配液体活检、无创筛查等应用的片段需求。

  3. 首次使用需完成哪些试剂配制？具体配比是多少？

  蛋白酶 K：125mg 蛋白酶 K + 6.5ml 蛋白酶 K 保存液，混匀后-20℃保存；

  SP DNA 洗涤液 2：12ml 试剂 + 48ml 95%–100% 无水乙醇，添加后做好标记，避免重复加醇。

  4. 试剂盒支持哪两种操作方式？无负压设备能否正常使用？

  支持真空负压法与常规离心法；无负压多联器时，用台式离心机即可完成全流程操作，适配所有常规分子实验室。

  5. ≤5ml 与 5–10ml 大体积样本的操作核心区别是什么？

  ≤5ml 样本：按比例加试剂后，一次性完成过柱结合；

  5–10ml 大体积样本：按大体积配比加试剂，分次上柱、反复离心，确保所有样本液完全通过纯化柱。

  6. 低温下试剂出现沉淀该如何处理？是否影响提取效果？

  SP 消化液 / 洗涤液 1低温易析出沉淀，37℃水浴加热至澄清，冷却至室温后即可使用，不影响 DNA 结合、洗涤与回收效率。

  7. 如何提升微量游离 DNA 的洗脱回收率？

  1. 洗脱液65–70℃预热，直接滴加在纯化柱基质中央；

  2. 加样后室温静置2–3 分钟，延长 cfDNA 洗脱时间；

  3. 最小洗脱体积≥50μl，可二次洗脱提升总回收量。

  8. 为什么不推荐 Nanodrop 定量 cfDNA？该用哪些方法？

  cfDNA 含量极低，Nanodrop 灵敏度不足、误差极大；推荐qPCR、Qubit、Tapestation进行精准定量与片段分析。

  9. 提取的 cfDNA 纯度如何？可直接用于哪些下游实验？

  提取的 cfDNA 无蛋白、盐类、酶抑制剂污染，纯度达标；可直接用于液体活检 qPCR、高通量测序（NGS）、基因突变检测等高精度实验。

  10. cfDNA 产量低、下游实验失败该如何快速排查？

  样本：样本反复冻融、保存不当导致 cfDNA 降解；

  消化：55℃孵育不足 30 分钟，样本消化不彻底；

  操作：大体积样本未分次上柱，DNA 结合不充分；

  残留：未空转除乙醇，残留乙醇抑制下游 PCR / 酶反应。