单组分TMB显色液（ELISA，HRP显色用）

产品描述:

TMB主要应用于酶联免疫吸附实验（ELISA)，免疫斑点杂交或者免疫组化以及氯和过氧化氢的检测分析。目前酶免疫分析（EIA)技术，已被广泛应用于抗原，半抗原或抗体的定量或定性检测分析。辣根过氧化物酶（HRP)及其偶联物是酶联免疫分析技术中常用的一种酶，由于3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB)在HRP的显色反应体系中，比其它色原具有更高的灵敏度且无致癌性而被广泛应用。为了满足不同的试剂盒产品研发与生产以及科研需求，本公司专门研制了针对不同类型的基于HRP的免疫分析用TMB显色液。

产品特点：无需混合，方便快捷，减少误差；灵敏度高不低于A、B液；稳定性好：2-8℃保存，有效期不低于36个月；显色终止后读数稳定；背景低：底物溶液在650nm检测时检测OD值小于0.04；质量可靠：产品批间差异小；外观：本试剂一般情况下为无色，有时略显浅蓝色或浅黄色

使用方法（ELISA）

1) 使用之前，取出适量单组份TMB显色液，使其回到室温再开始使用；

2) 参考ELISA检测试剂盒的实验步骤，当与HRP标记抗体孵育一段时间后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5min。

3) 洗涤完毕后，去除洗涤液，加入100μl单组份TMB显色液。

4) 室温避光孵育5-30min或更长时间（可长达24h），直至显色到预期深浅。【注意】：建议根据实验需求选择最佳试剂用量、显色时间和反应温度。

5) 直接在370nm测定吸光度。或者加入100μl 0.5-2M H2SO4终止反应，随后在450nm测定吸光度。

常用问题

1. 背景显色太深

1）如果背景（没有样品的对照）显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，如商业化封闭液或者和一抗相同来源的血清（10%）进行封闭。另一方面，使用经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。

2）可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

2. 没有显色或显色太弱

1）适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在离心管内，检测二抗是否被正常显色。

2）可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如生物素检测体系。

3）可以适当延长显色时间。

4）如果上述改进不能获得预期效果，可以考虑更换效果更好的一抗或ELISA试剂盒。

 注意事项

1) 本品含TMB和H₂O₂，对人体有刺激性，请注意防护。

2) 如发现本品出现浑浊或颜色变为蓝色，请停止使用。

3) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。