对-硝基苯磷酸二钠六水(片剂5mg/175mg)

产品描述

pNPP，英文名p-Nitrophenyl Phosphate，中文名对硝基苯磷酸盐，酶联免疫吸附实验（ELISA）中高灵敏度检测碱性磷酸酶（ALP）活性的显色底物，反应生成一可溶性黄色终产物，加入3N NaOH终止反应后，可用分光光度计在405nm处读取吸光度。

本品以片剂（tablet）形式提供，每片含5mg对硝基苯磷酸二钠六水合物（pNPP），溶于水，达试剂级别（Reagent grade）。

配制方法:(1)使用前需将片剂置于常温回温至少20min，溶液现配现用。(2)取1片pNPP溶解于适量甘氨酸缓冲液或二乙醇胺缓冲液以达到想要的浓度。通常情况pNPP使用浓度为1mg/ml。(3)甘氨酸缓冲液（0.1M glycine buffer, pH 10.4, with 1 mM MgCl2 and 1 mM ZnCl2）：依次加7.51g 甘氨酸，203mg MgCl2和136mg ZnCl2到约980ml去离子水，充分溶解混匀。用19M NaOH调整pH到10.4，之后用去离子水定容到1L。(4)二乙醇胺缓冲液（1M diethanolamine buffer, pH 9.8, with 0.5mM MgCl2）：依次加97ml 二乙醇胺和100mg MgCl2到800ml去离子水中，充分溶解混匀。用10M HCl调整pH到9.8，之后用去离子水定容到1L。

操作方法:对碱性磷酸酶偶联物的ELISA步骤：按照每孔加入200μl底物溶液（通常1mg/ml）的比例加量，并将平板室温避光孵育30min。按照每200μl反应混合物加入50μl 3M NaOH终止反应。之后置于多孔酶标仪上读取405nm处的吸光值。