产品简介
Taq DNA Polymerase简称Taq酶,是最常用的DNA聚合酶之一。Taq DNA Polymerase 是从含有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化的热稳定蛋白,其分子量为 94 KD。Taq DNA Polymerase 具有 5'-3'DNA 聚合酶活性和 5'-3'外切核酸酶活性,无 3'-5'外切酶活性。在 PCR 反应中,Taq DNA Polymerase 延伸速度为 1-2 kb/min,产物3'端带 A,可直接用 TA 载体克隆。
活性定义:1单位(U) Taq DNA Polymerase 活力定义为在74℃、30min 内,以活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物,将 10 nmol 脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
酶储存缓冲液:100 mM KCl,20 mM Tris-HCl (pH 8.0),0.1 mM EDTA,1 mM DTT,蛋白稳定剂和 50%(v/v) 甘油。
10×Taq Buffer:10×Taq Buffer 含 KCl, (NH4)2SO4,15mM MgCl2,Tris-HCl(pH 8.3),0.5% Tween 20,0.5% NP40 和常规 PCR 增强剂。
质量控制:SDS-PAGE 检测纯度大于 99%;经检测无外源核酸酶活性,PCR 方法检测无宿主 DNA 和表达载体 DNA 残留, 能有效扩增人类基因组中的单拷贝基因。
使用方法
1,取本品室温解冻,也可提前放置于 2-8℃,解冻后翻转混匀。
| 体系成分 | 用量 |
| 模板 DNA | * |
| Primer 1(10μM) | 1μǀ |
| Primer 2(10μM) | 1μǀ |
| dNTPs(10mM) | 1μǀ |
| 10×Taq Buffer | 5μǀ |
| Taq DNA Polymerase(2.5U/μǀ) | 1μǀ |
| ddH2O | 补充至 50μǀ |
【注】:最佳反应体系和最佳反应条件应根据实际需要设定。
2,PCR 反应循环的设置:
95℃ 3 min
94℃ 30 sec
55℃ 30 sec 30 cycles
72℃ 1 min
72℃ 5 min
12℃ soak
3,结果检测:反应结束后取 5μǀ反应产物,琼脂糖凝胶电泳检测。