产品简介
PNGase F 是去除糖蛋白中几乎所有 N-连接寡糖的最有效的酶促法。PNGase F 是一种酰胺酶，切割糖蛋白上的 N-连接糖，切割位点为最内侧 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺残基之间，切割的糖型包括高甘露糖型、杂合型和复杂型寡糖。
酶活定义：1 单位指在 10 µl 总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内从10 µg变性 RNase B中去除超过 95% 的糖链所需的酶量。
产品特点
1：酶切后的 N-糖链核心寡糖保持完整，适合用于进一步分析。
2：非重组表达，不含糖苷内切酶 F1、F2 或 F3 污染。
3：纯度 ≥ 95%（经 SDS-PAGE 和 ESI-MS 测定）。
4：贮存于 50% 甘油中。
5：拥有最佳活性和稳定性，可稳定贮存长达 24 个月。
6：可在非变性或变性条件下使用。
| PNGase F (50U/μl) | 30μl | 150μl |
| 10×糖蛋白变性缓冲液 | 1ml | 1ml |
| 10×PNGase F 反应缓冲液 | 1ml | 1ml |
| 10% NP40 | 1ml | 1ml |
操作步骤
一、变性反应条件：
1.将1-20µg糖蛋白，1µl糖蛋白变性缓冲液（10X）和ddH2O（如有必要）混合，制成10µl总反应体积。
2.100℃加热反应10分钟使糖蛋白变性。
3.在冰上冷却变性糖蛋白并离心10秒。
4.加入2µl PNGase F 反应缓冲液（10X），2µl 10% NP-40和6µl ddH2O，使总反应体积为20µl。PNGase F被SDS抑制，因此在变性条件下反应混合物中必须含有NP-40。未能将NP-40纳入变性方案将导致酶活性的丧失。
5.加入1µl PNGase F，轻轻混合。
6.选择方法分析
【注意】：评估去糖基化程度的最简单方法是通过SDS-PAGE凝胶上的迁移率变化。
二、非变性反应条件：
在对天然糖蛋白进行脱糖基化处理时，建议取一份糖蛋白样品进行变性处理，以提供完全脱糖基化蛋白的阳性对照。然后可以进行非变性反应将其与变性反应进行比较，以确定反应完成的程度。
1.将1-20µg糖蛋白，2µl PNGase F反应缓冲液（10X）和ddH2O（如有必要）混合，制成20µl总反应体积。
2.加入2-5µl PNGase F，轻轻混合。
3.在37℃下孵育反应4-24小时。
4、选择分析方法。
【注意】：评估去糖基化程度的最简单方法是通过SDS-PAGE凝胶上的迁移率变化。
注意事项
1)SDS会抑制 PNGase F 的活性，因此反应混合物必须含有 NP-40。目前还不清楚这种非离子去污剂抵消SDS 抑制作用的机理。
2)要在非变性条件下对糖蛋白去糖基化，建议增加酶量并延长温育时间。
3)PNGase F 不会切割含有核心 α1-3 岩藻糖的 N-连接糖链。
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