HPTS；Solvent Green 7pH荧光探针

产品简介

8-羟基芘-1,3,6-三磺酸（8-Hydroxypyrene-1,3,6-trisulfonic acid Trisodium Salt, HPTS，CAS：6358-69-6），也称为溶剂绿7（Solvent Green 7），在生理范围内是一种有用的pH指示剂。本品以冻干粉形式，易溶于水，膜不通透：只在水相里响应，不会进细胞，适合纯水溶液、缓冲液、无机盐水溶液。在403nm和450nm处的最大激发波长，以及在510nm的最大发射波长下测定的荧光强度，随着pH从5增加到9的过程中，荧光分别随之降低和增高。

HPTS曾被用于激发比率型的成像分析，从而监测内吞性脂质体、酸性细胞器或活细胞浆内的pH变化，以及pH值的测定.HPTS不具有膜渗透性，可通过微注射、电转或脂质体介导的运输或通过ATP门控的离子通道进入胞内。HPTS也可通过膜片钳技术加载进入胞内。据报道HPTS比BCECF具更低的光毒性。

产品特性

CAS:6358-69-6

中文名称:8-羟基芘-1,3,6-三磺酸 三钠盐

英文名称:8-Hydroxypyrene-1,3,6-trisulfonic acid trisodium salt

别名:溶剂绿7  HPTS; Solvent Green 7

产品关键词:HPTS 8-羟基- 1.3.6-三磺酸三盐; pH sensor 子探: LysoSensor yellow/Blue DND-160 ; BCECF,AM; Leadmium Green镉子探针: CAS:6358-69-6;

分子式:C₁₆H₇Na₃O₁₀S₃

分子量:524.39

纯度:≥98%(HPLC)

Ex/Em:454/520nm (in water)

外观:黄色至绿色粉末

溶解性:溶于水(50mg/ml)

储存及运输条件：2-8°C避光干燥保存，至少2年有效

使用方法(仅供参考)

一、试剂配制

1. HPTS 母液配制

试剂：HPTS 三钠盐（Pyranine），超纯水配制

母液浓度：10 mM HPTS 储备液称取 HPTS 52.4 mg，定容至 10 mL 超纯水，避光 4℃保存，有效期 1 个月。

工作液终浓度：20 μM（测试体系固定）每 1 mL 待测缓冲 / 无机溶液加入 2 μL 10 mM HPTS 母液。

例：5 mL 待测液 + 10 μL HPTS 母液 → 终浓 20 μM

2. 系列 pH 标准缓冲液（标定用，5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5 七个梯度）

配制完成后先用酸度计精准标定每个缓冲液真实 pH，记录实测 pH。（曲线横坐标）。

【注】若样品含 NaCl 等无机盐：标曲缓冲液中添加与待测样品同等浓度无机盐，消除离子强度干扰。

二、荧光仪器参数（比率双激发，固定 Em=510 nm）

激发波长 λ₁=403 nm（酸式 HPTS，H₃PTS/H₂PTS⁻）

激发波长 λ₂=450 nm（碱式 HPTS，HPTS³⁻/PTS⁴⁻）

发射波长：Em = 510 nm，狭缝 5 nm（仪器默认即可）

读数：I₄₀₃（403 激发荧光强度）、I₄₅₀（450 激发荧光强度）

比率计算公式：R=I₄₅₀/I₄₀₃

三、标准曲线测试步骤

取 7 支 EP 管，各加 990 μL 对应 pH 标准缓冲液 +10 μL 10 mM HPTS 母液，混匀，终浓度 20 μM；

室温静置 5 min（HPTS 质子平衡完成）；

依次上机：同一样品分别测 403 nm、450 nm 激发下 510 nm 发射荧光，记录 I₄₀₃、I₄₅₀；

计算每组对应 R=I₄₅₀/I₄₀₃；

以实测 pH（酸度计读数）为 X，比率 R 为 Y拟合标准曲线。

曲线拟合公式（HPTS 理论亨德森 - 哈塞尔巴尔赫方程，推荐非线性拟合）

pH=pKa​+log R−Rmin​​/Rmax​−R

pKa (HPTS)=7.30（水相、常温）

Rmin：全酸态最小比值（pH＜5）；Rmax：全碱态最大比值（pH＞8.8）

简易实用方案：pH5.5~8.5 区间线性拟合 Y=kX+b，多数无机体系 R 与 pH 线性相关，R²＞0.995 可用。

四、待测无机样品测 pH 操作

待测无机溶液 990 μL+10 μL HPTS 母液，混匀静置 5 min；

同仪器参数测 I₄₀₃、I₄₅₀，算出 R 样；

代入标准曲线方程，计算样品荧光 pH。

注意事项

1）HPTS pH＞9.0 后 R 不再变化，彻底饱和，无法标定 pH≈12 强碱；

2）离子强度＞1 M 高浓强碱盐需在标曲缓冲匹配同浓度盐，减少 pKa 偏移；

3) HPTS在水溶液中不是特别稳定，建议条件允许的话，初次使用本品时将其置于室温回温后，分装成小量粉末(避光干燥保存)，之后取一管用水溶解配制成母液(比如:10mM)，然后用合适的生理性溶液稀释到所需的工作浓度。全程需避光。

4)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

补充：pH≈12 高碱标定替换方案（HPTS 不可用，荧光素钠）

荧光素钠（pKa≈6.4，pH10~13 荧光饱和定量）

母液：1 mM 荧光素钠水溶液；工作终浓度 5 μM；

Ex=490 nm，Em=520 nm；

缓冲选用：0.1 M Na₂HPO₄-NaOH / 0.1 M KCl-NaOH 配制 pH10.5、11、11.5、12、12.5 梯度碱液，酸度计定值；

荧光强度 I 对 pH 做标准曲线，pH12 区间线性定量。