Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit冷冻酵母转化试剂盒 (120 Rxns)

Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit™（酵母转化试剂盒）是一款专门设计用于酵母转化和文库筛选的试剂盒，比目前商业或公开的文献方法更快捷和更有效。本试剂盒制备的酵母细胞可立即用于转化或冻存待用（≤ -70°C）。本试剂盒制备的细胞适用于环形和线性DNAs转化，同时也能用于其他真菌包括C. albicans，S. pombe和P. pastoris的转化。

产品特点：

• 高转化效率：每µg质粒DNA（环形）可产生10⁵ - 10⁶个酵母转化子；
• 制备好的感受态细胞可冻存后待用；
• 快速简单步骤于10min内可制备酵母感受态细胞；
• 简单单一步骤，1h内完成转化；
• 适用菌株类型广（S. cerevisiae, C. albicans, S. pombe, Pichia pastoris）；
• 简单方法用于多质粒转化；

产品组分：本试剂盒可做120个常规转化或600个微量转化实验。试剂盒4℃一年有效。

操作步骤【见下图】：

1、感受态细胞制备

30℃，于10ml YPD肉汤培养酵母菌直至中数量级（~5 x 10⁶-2 x10⁷ cells/ml 或OD₆₀₀= 0.8-1.0）。以下步骤室温进行。

1-1，500 x g离心细胞4min，吸掉上清液；

1-2，加入10ml EZ1溶液清洗沉淀。重新离心沉淀细胞，吸掉上清液；

1-3，加入1ml EZ2溶液重悬沉淀细胞。

此时获得的感受态细胞即可直接用于转化或冻存备用（≤ -70°C）。注意需缓慢冻存细胞，不可使用液氮瞬间冻存细胞。

2、转化

以下步骤适用于新鲜制备和冻存（室温融化）的酵母感受态细胞。

2-1，取50µl感受态细胞与0.2-1µg DNA（体积少于5µl）混合；加入500µl EZ3溶液，完全混合；

2-2，30°C孵育45min，孵育过程中用手指轻弹或低速涡旋（如果适用于转化DNA）2-3次让其混匀；

2-3，从上面转化混合液中取50-150µl到适当平板上，没有必要沉淀或清洗细胞。、

2-4，30°C孵育平板2-4天使得转化子生长。