Hoechst 33258 即用型染色液

产品简介

Hoechst 33258，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。

Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。FS1198粉末形式提供，溶于水，溶解度可达10mg/ml，FS1199为10ug/ml即用型水溶液形式提供。

产品组成

产品特性

1）CAS ：23491-45-4

2）英文同义名：2'-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5'-bibenzimidazole Trihydrochloride Hydrate[for Biochemical Research];BisBenzimide H 33258；

3）中文同义名：2'-(4-羟苯基)-5-(4-甲基-1-哌嗪基)-2,5'-联苯并咪唑三盐酸盐水合物；双苯并咪唑H33258；赫斯特33258；赫斯特荧光染料 33258；

4）分子式：C₂₅H₂₇Cl₃N₆O 

5）分子量：533.88 (anhydrous basis)

6）纯度：≥99%

7）外观：黄绿色粉末

8）溶解性：溶于水（10 mg/ml）

9）Ex/Em：346/460 nm；350/461 nm（Hoechst 33342-DNA）；

10）化学结构： 

保存与运输方法：干粉-20℃避光干燥保存，3年有效。配好溶液6个月有效。运输：冰袋运输。

操作步骤(仅供参考)：

储存液配制

用双蒸水溶解，溶解度高达10mg/ml，根据实际情况配制所需浓度的储存液如5mg/ml。储存液2-8ºC避光保存，至少6个月有效。【注意】：本品用磷酸盐缓冲液溶解会出现沉淀。

一、工作液配制

用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作浓度（0.5-10μg/ml）。

 用于固定的细胞或组织：

（1）对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。

（2）对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可；对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

（3）吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

（4）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

用于于活细胞或组织：

（1）加入适当量Hoechst 33258染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。

（2）在适宜于细胞培养的温度下培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。

注意事项

1）荧光染料都存在淬灭的问题，为减缓荧光淬灭建议使用抗荧光衰减封片剂。

2）建议染色后尽量当天完成检测，活细胞或组织染色后应立即观察。

3）为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液（Fluoromount-GTM抗荧光淬灭封片剂（水溶性），CAT#:FSM0033-5ML）。

4）为了您的安全及健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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