发布日期:2019/10/30 14:00:42
  FITC标记荆豆凝集素组织化学染色步骤
    1.组织切片经脱蜡处理,若是Bouin液固定的组织,用70%乙醇洗3次除去组织切片内的黄色后,再用蒸馏水漂洗;
 
    2.PBS漂洗(含1%牛血清白蛋白)2次,每次5分钟;
 
    3.加入FITC-凝集素(PBS适当稀释),置湿盒内孵育,室温1小时;
 
    4.PBS漂洗3次,每次5分钟;
 
    5.水溶性封片剂封片,荧光显微镜观察。
 
    6.结果  FITC标记的凝集素能直接与组织细胞内的糖基结合,从而显示糖基的位置,可用于检测组织细胞中的糖成分,阳性部位呈黄绿色荧光。
 
注意事项
    (1)固定液:以Bouin固定液为佳,也可用70%乙醇固定;
    (2)与其他组织化学方法一样,染色过程中,应始终保持一定湿度,使切片保持湿润状态;
    (3)需经预实验确定FITC-凝集素的*佳工作浓度;
    (4)凝集素的活性部位需重金属离子维持,故可用TBS作为缓冲液,加微量的金属(CaCl2、MgCl2、MnCl2各1.0mmol/L),可增强凝集素的结合能力。
FITC标记凝集素染色

FITC标记的伴豆素I-B4染色示大鼠脊神经节中小型神经元伴豆素I-B4结合位点

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