Western及IP细胞裂解液(含PMSF)

产品简介

Western 及 IP 细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP) 又称Lysis Buffer for WB/IP Assays  ，是一种在非变性条件下裂解细胞或组织样品从而制备蛋白样品的裂解液。本裂解液裂解的细胞或组织样品，可以用于 PAGE ，Western ，免疫沉淀(immunol precipitation ，IP) 、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。

Western 及 IP 细胞裂解液的主要成分为 20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及 sodium pyrophosphate ，β-glycerophosphate，EDTA，Na₃VO₄，leupeptin 等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

产品组成

使用方法

1.对于培养细胞样品：

1-1 、融解 WB 及 IP 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF ，使 PMSF 的最终浓度为 1mM ，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

a 、对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS 、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗) 。按照 6 孔板每孔加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞 1-2 秒后，细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解2-10min。

b 、对于悬浮细胞：离心收集，轻轻弹击管底以把细胞尽量分散开。按 6 孔板每孔加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。

c 、对于细菌或酵母：对于 1ml 菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用PBS 洗涤一次，充分去除液体后，轻轻 vortex 或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入 100-200 微升裂解液，轻轻 vortex 或者弹击管底以混匀，冰上裂解2-10min。如果希望获得更好的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后在使用本裂解液进行裂解。

裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞或者 1ml 的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入 100 微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 150 微升或 200 微升。每 100 万动物细胞用100 微升本产品裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为 2-4mg/ml ，不同细胞有所不同。

1-2、充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

2.对于组织样品：

2-1 、把组织剪切成细小的碎片。

/2-2 、融解 WB 及 IP 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF ，使 PMSF 的最终浓度为 1mM ，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

2-3 、按照每 20 毫克组织加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

2-4 、用玻璃匀浆器匀浆，或使用研磨，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。