Fura Red, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

产品简介

Fura Red是一种可见光激发的Fura-2类似物，提供独特的可能性使其与单波长激发、绿色荧光的钙离子探针（比如：Fluo-8）联合使用时，通过显微光度术、成像或流式细胞术来比率法测定单细胞内的Ca2+水平。Fura Red, AM是Fura Red的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fura Red，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。Fura Red, AM能够与Fluo-3 AM、Fluo-4 AM、Fluo-8 AM等同时加载进入细胞。两种钙离子探针结合使用的优势在于能用更长的激发波长。这比传统的紫外或近紫外激发的比率型探针对细胞造成更小的伤害，由于可见光波长对细胞的光毒性更小。Fura Red显著的斯托克斯位移使其能与荧光素或荧光素样的染料（使用单一激发波长）进行多色荧光检测。比如，研究者想同时测定单核细胞和粒细胞的钙流和氧化爆发，通过同时分析Fura Red和罗丹名123（二氢罗丹名123的氧化产物）的荧光值来满足目的。Fura Red也能与转染细胞内的蓝色荧光蛋白结合使用。

产品特性

1）CAS NO：149732-62-7

2）化学名：Glycine, N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]-N-[5-[2-[2-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl] amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]-2-[(5-oxo-2-thioxo-4-imidazolidinylidene)methyl]-6-benzofuranyl]-, (acetyloxy)methyl ester

3）同义名：Fura Red, Acetoxymethyl Ester;

4）分子式：C47H52N4O24S

5）分子量：1088.99

6）纯度：≥95% (HPLC)

7）最大激发/发射波长：471/652 nm（Ca2+-free），436/630 nm（Ca2+-bound）

8）溶解性：溶于DMSO（5mM）

使用方法

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液： 称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：#FS0432）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3)（货号：#FSH043）或者其他生理缓冲液.

B，操作步骤

1） 用无水DMSO溶解Fura Red, AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Fura Red, AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fura Red, AM中加入11.5µl 无水DMSO）。准备Fura Red, AM工作液之前，有时需要往Fura Red, AM储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。

2） 用HHBS或其他生理缓冲液将 Fura Red, AM+DMSO储存液稀释到1-20µM的工作液。

3） 【可选】如果细胞内（比如CHO细胞）含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）(货号#FS0498)或磺吡酮（Sulfinpyrazone， 0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

4） 将准备好的Fura Red, AM染色工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。室温或37℃孵育20-120min。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6） 37℃再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

7） 用合适的激发/发射波长来检测荧光（见附录I： Fura Red的激发和发射光谱）。

附录I Fura Red的激发和发射光

图：Fura Red在不含钙离子下的激发和发射光谱（上图）；Fura Red与钙离子结合后的激发和发射光谱（下图）。

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