线性化聚乙烯亚胺PEI(速溶型MW40000)

产品简介

  Polyethylenimine Linear（PEI）溶液是由一种阳离子聚合物转染试剂，分子量40000，它能与核酸形成复合物，并使该复合物进入哺乳动物细胞。线性PEI转染试剂广泛适。该试剂可在含血清与抗生素的完全培养基中发挥作用，即使在有血清存在的情况下，它仍然能高效的将核酸导入细胞。实验操作简单，对大多数培养细胞都有较高的转染效率(用于常见细胞系，如HEK-293、HEK293T、Hep G2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等)，并且细胞毒性较低。

线性PEI转染试剂具有如下优点： 

l 优越的转染效率

l 重组蛋白的高表达水平

l 与含血清的培养基相兼容

l 低细胞毒性，易于操作

质量控制

每批次产品均在标准条件下进行功能性转染测试，在HEK293T模型细胞中可获得高水平转染效率。具体效率会因细胞状态、质粒、培养条件和操作流程而异。在内部标准测试条件下，使用带EGFP的质粒转染HEK293T细胞的阳性率通常可达90%以上。

产品组成

操作流程

前期准备(试剂与质粒准备)：

细胞要求：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议用胶原酶。转染前12-24小时铺板，转染时细胞汇合度达到70%-80%；对于HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞，可提前两天铺板并适当降低密度。

质粒要求：请务必使用高质量转染级无内毒素质粒。通过 260 nm 光吸收测定 DNA 浓度，260 nm / 280 nm 比值确定 DNA 纯度（比值应该在 1.8~2.0 的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

贴壁细胞转染方法

①、接种细胞，转染前一天，消化细胞并计数。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70～80%。

②、准备DNA-PEI复合物， DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。用 Opti-MEM 或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每1μg DNA 需用 2～6μL(具体参考表2)线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10～25 min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 Falcon 5mL /14 mL 离心管。

③、转染细胞，直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻摇动培养板/培养皿。本品可在含血清培养条件下进行转染。若采用无血清条件形成复合物并加样，可根据细胞耐受性在4～6 h后补加完全培养基或更换为新鲜完全培养基。 【注】：需要将培养板中的培养基全部弃掉，因为此时未被细胞摄取的PEI-DNA复合物仍残留在培养基中，持续接触会增加细胞毒性，影响后续细胞状态和转染效率。换液过程中用PBS建议进行1-2次清洗。

④、孵育细胞和分析结果，在CO²培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快7h即可检测到转入基因的表达。 请自行确定最适合检测时间。

悬浮细胞转染方法

①、细胞准备，转染前一天或当天准备处于对数生长期的悬浮细胞，确保细胞状态良好，建议转染时细胞活率不低于90%。根据细胞类型调整细胞密度，通常可从 0.5×10⁶～2.0×10⁶ cells/mL 的范围开始优化。

②、准备DNA-PEI复合物，将 DNA、线性PEI转染试剂及稀释液平衡至室温。用 Opti-MEM 或其他适合的无蛋白、无血清缓冲液分别稀释质粒 DNA和线性PEI转染试剂。按照预设比例混合DNA和PEI。建议初始优化条件可从每1μgDNA对应1～6μL(具体参考表2）转染试剂开始。最佳比例需根据细胞类型和应用目的进行优化。将稀释后的 PEI 溶液缓慢加入DNA溶液中，轻轻吹打或混匀，避免剧烈振荡。室温静置10～20 min，形成DNA-PEI复合物。

③、加入细胞，将待转染悬浮细胞接种于适宜培养容器中，并调整至目标工作体积和细胞密度。将形成好的 DNA-PEI 复合物缓慢加入细胞悬液中，轻轻混匀，使复合物在体系中均匀分散。转染期间可维持细胞于常规培养条件下孵育。

④、培养与换液，将细胞置于37℃、5% CO^₂培养箱中继续培养。对于耐受性较好的悬浮细胞，可直接继续培养并在 24～48 h 检测外源基因表达。对于对转染较敏感的细胞，可在转染后 4～24 h 通过离心换液或补加新鲜培养基，以降低转染复合物带来的细胞压力。具体条件需根据细胞状态进行优化。

⑤、结果检测，部分报告基因可在转染后较早时间观察到表达，但通常建议在 24～72 h 进行转染效率和表达水平检测。

不同细胞培养容器转染用量（表2）:

注意事项

1)、对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。

2)、即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是 DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用 Opti-MEM 培养基以达到最佳转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。

3)、对大多数细胞而言，每1ug使3.0ul PEI转染试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每 1 ugDNA 使用1~6 ul体积线性PEI转染试剂进行优化。

4)、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。