MitoTracker Green FM 绿色线粒体荧光探针

Ex (nm)/Em(nm):490 /523 nm

使用方法

1. 储存液的配制

本品是以粉末形式提供，使用前需将本品回温至室温。之后使用细胞培养级别的无水DMSO（CAT:FS0306）将其充分溶解至终浓度1 mM。 本品M. Wt.= 671.88 g/moL，换算下来，50 µg粉末只需加入74.4 µL DMSO即可得到1 mM储存液。根据单次的使用量将储存液分装后放到-20℃避光，避免反复冻融。

2.工作液的配制

用适当的缓冲液或者细胞培养基稀释1 mM储存液至工作液浓度。本探针MitoTracker Green FM的推荐浓度为20-200 nM，浓度过高可能对其他细胞结构进行染色。 

3.染色及检测

3.1 贴壁细胞的染色

培养皿/板内加入适量的培养基覆盖盖玻片进行爬片培养。当细胞长至所需丰度，吸除培养液，加入37℃预热的MitoTracker Green FM染色工作液。在所使用细胞正常培养条件下孵育15-45 min（最佳孵育时间需优化）。染色结束后，使用新鲜培养液或缓冲液替换上述染色液，即可将其置于荧光显微镜下观察或荧光酶标仪下读数。或者进行后续的固定和透化步骤，见步骤4。

3.2 悬浮细胞的染色

离心收集细胞，吸除上清，利用37℃预热的MitoTracker Green FM染色工作液轻轻重悬细胞。在所使用细胞正常培养条件下孵育15-45 min（最佳孵育时间需优化）。染色结束后，离心收集细胞，利用37℃预热的新鲜培养液或缓冲液重悬细胞，被染色的细胞可用流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光显微镜进行分析。

如果需要盖玻片上固定化的细胞，那么可在铺片前先用多聚赖氨酸（poly-D-lysine）包被载玻片或盖玻片。 或者进行后续的固定和透化步骤，见步骤4。

4. 固定和透化

4.1 染色结束后，利用培养液或缓冲液清洗细胞。

4.2 小心吸走清洗液。换用新鲜配制且预热的含2-4%甲醛的缓冲液或培养液进行细胞固定。经验证，本染料MitoTracker Green FM由含3.7%甲醛的完全培养液于37℃孵育内皮细胞15min能起到良好的固定效果。

4.3 清洗细胞：吸除固定液，用适当缓冲液冲洗细胞数次。

4.4 细胞透化（可选）：

像ICC等实验需要细胞要做透化，则可将已固定的细胞直接加入含有去污剂如Triton X-100的缓冲液中孵育。透化结束后，用缓冲液清洗细胞即可进行后续ICC实验。经检测，利用含0.2% Triton X-100的PBS孵育内皮细胞10min可以达到良好的透化效果。另外，还可利用预冷的丙酮透化5 min，之后用PBS清洗细胞。经验证，即使后继没有进一步的抗体标记，丙酮透化处理也可降低背景信号。 

注意事项

1)  荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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