LysoTracker Green DND-26溶酶体绿色荧光探针

产品描述：LysoTracker®系列探针是对活细胞中的酸性区室进行选择性染色的一类荧光染料，该类探针具有几大重要的特点，1）选择性标记酸性细胞器；2）纳摩尔级（nM）浓度即可有效标记活细胞；3）具有多色探针提供，可根据情况对样品进行多标实验。LysoTracker®结构上由一个荧光基团和相连的弱碱基构成，可自由穿过细胞膜，一般聚集在球形细胞器上，适用于观察溶酶体内部生物合成及相关发病机理。Lysotracker中性pH下仅仅发生部分质子化，因此该探针标记细胞器的原理可能与其完全质子化并滞留在细胞器膜上有关。

本品LysoTracker® Green DND-26为绿色荧光标记的溶酶体探针，具有504/511nm的zui大激发/发射波长。本品以溶于无水DMSO的1mM储存液形式提供。

使用方法（以下步骤仅做参考，具体请根据实际情况或参考文献资料来调整。）

使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。

1. 工作液的配制

(1) 利用培养基或合适的缓冲液将1 mM 储存液稀释至工作浓度，推荐工作液浓度为50-75 nM；

2. 染色

2.1 对于贴壁细胞

（1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。

（2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30 min～2 h（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。[注]：对Lysotracker Green DND-26内化过程的动力学研究表明，活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生“碱性效应Alkalizing effect”，也就是说过长孵育时间会诱导溶酶体pH值提高。建议仅当该探针于37℃孵育细胞1-5 min才可用作pH指示剂。

3）利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

2.2 对于悬浮细胞

1）离心，吸除上清。                      

2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育30 min～2 h（具体时间需根据细胞类型而定）。

3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。

4）置于荧光镜下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或加长染色时间。

 【注】:对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经BD Cell-Tak处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。

 注意事项

（1）为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。工作液现配现用。

（2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附表1. Lysotracker&Lysosensor系列溶酶体探针的光谱总结