活细胞示踪剂CM-DiI （红色）

产品简介

   CellTracker CM-DiI，DiI（DiIC18(3)）衍生物，在DiI结构上加入了具中度巯基反应性的CM氯甲基替代基团，使其能与细胞内含巯基的肽和蛋白结合，使其能抵抗醛类的固定作用。不同于传统的细胞膜探针PKH26和DiI，CM-DiI 在细胞固定、破膜及石蜡包埋的整个过程中均能很好的保留在细胞内，因此，特别适合同时做细胞膜标记以及后续的免疫组化、荧光原位杂交或电镜观察的分析实验。

CellTracker CM-DiI适用于细胞运动或定位的监测，染料能很好维持，允许对细胞运动的多代示踪研究。具备以下特征：

a）使用方便，只需吸掉培养液，加入探针，30min孵育，显微成像即可；

b）荧光信号至少可持续72h以上（一般3-6代），染料只传到子代细胞，不会染上邻近细胞；

c）毒性很低，不会影响细胞增殖和活力；

d）红色激发/发射的光谱特性（Ex/Em=553/570 nm），适合同绿色荧光染料或蛋白联合使用进行多重标记；

总而言之，CellTracker CM-DiI具有良好的示踪特征：对细胞无毒，稳定长效，染料很好保留在胞内，生理pH下荧光信号非常强。

基本特性

CAS：180854-97-1

化学名：3H-Indolium, 5-[[[4-(chloromethyl)benzoyl]amino]methyl]-2-[3-(1,3-dihydro-3,3-dimethyl-1- octadecyl-2H-indol-2-ylidene)-1-propenyl]-3,3-dimethyl-1-octadecyl-, chloride

分子式：C₆₈H₁₀₅Cl₂N₃O

分子量：1051.5 g/mol

纯度：≥95%

Ex/Em：553/570 nm（甲醇）

外观：红色固体

溶解性：溶于DMSO，乙醇，DMF

储存条件：-20℃干燥保存，1年有效。

使用方法【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

1.染色液制备

1）储存液制备：用DMF、 DMSO或乙醇配置浓度1-2mM的储存液。例如，将50 μg CM-DiI （Mw：1051.5g/mol）溶于48 μl无水DMSO中，充分溶解，即得到1mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且避光干燥保存。

2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或DPBS）稀释储存液，调整到1-2 μM的工作浓度。【注意】最佳的工作浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。

2. 细胞染色

1）于实验前准备好染色工作液；

2）加染色工作液进入待标记细胞，37℃孵育≤5min，然后再于4℃孵育15min。【低温孵育可降低细胞对

染料的内吞作用，有助于染料对质膜的标记，并且降低染料定位细胞质囊泡的可能性。】

3）染色结束后，用PBS清洗细胞，并用新鲜培养基重悬细胞。

【注意】对于贴壁细胞，可直接在其贴壁状态下进行荧光标记，相较于消化处理后的细胞呈现更高活力。

3. 细胞染色后处理

1）经CM-DiI染色后的细胞置于3.7%（w/v）多聚甲醛（溶于PBS），于37℃固定10min；

2）室温条件，用PBS清洗2次，每次5min；

3）于-20℃中，用丙酮透化处理10min；

4）室温条件PBS清洗2次，每次5min；

5）之后根据自身的实验要求以及细胞类型，进行后续的实验如石蜡包埋-免疫组化分析，电镜分析等。

资料显示，a）经CM-DiI染色后的PC12大鼠嗜铬细胞瘤细胞兼容于2%（w/v）多聚甲醛固定和0.2%（w/v）Triton X-100的透化作用；b）经绵阳淋巴系统纯化的CM-DiI标记细胞，经甲醛固定，石蜡包埋，切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇、水化后仍能维持荧光；

附表 DiD，DiO，DiI，DiR和DiA光谱特征汇表

注意事项

（1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

（2）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

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