DiR 细胞膜深红色荧光探针，DiR碘化物

 产品简介

  DiI, DiO, DiD和DiR作为一类长链的亲脂性二烷基碳菁类染料（Dialkylcarbocyanines）荧光染料家族，用于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构。作为一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。一旦进入细胞后，它们在细胞内质膜中逐步扩散，于最佳浓度条件下可将整个细胞均匀染色。这些染料具很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。

四种染料呈现不同的荧光颜色，DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光），为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和DiI分别用标准FITC和TRITC滤光器检测，可结合使用。DiD可被633 nm氦-氖（He-Ne）激光激发，具有比DiI更长的激发和发射光波长，特别适合用于标记具本底荧光的细胞和组织。而，DiR在体内活体成像或者示踪中意义非凡，因其所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织，并且在红外光范围内，其本底荧光水平很低。

本品以DiR的碘盐形式提供，适用于荧光检测研究。 

基本特性

CAS:100068-60-8

同义名：DiR lodide; DilCl8(7);1,1-diocaey-3.3.3,3-tetramethylindotricarbocyaine iodide;

化学名：Benzoxazolium, 3-octadecyl-2-[3-(3-octadecyl-2(3H)-benzoxazolylidene)-1-propenyl]-, perchlorate

分子式：C₆₃H₁₀₁IN₂

分子量：1013.40

纯度：≥95% (HPLC)

Ex/Em：750/780 nm （甲醇）

外观：蓝色至深蓝色固体

推荐滤光器: Omega-XF 112, Chroma 41009

溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇

储存条件：-20℃干燥保存，1年有效。

使用方法【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

1.染色液制备

1)储存液制备:用DMSO或乙醇配置浓度1~5 mM的储存液。例如，取25mg DiR (Mw: 1013.39g/mol)溶于4.93ml无水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃避免反复冻融，且要避光保存，

工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作浓度。【注意】工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。

2.悬浮细胞染色

1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×10⁶/mL。

2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。

4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5）再重复3），4）步骤两次。

3.贴壁细胞染色

将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。

在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。

4.活体成像

①配制储备液:DiR溶于DMSO制成1mM的DiR储备液;如5mg固体→加入5mL DMSO（推荐无水DMSO CAT:#FS0306）；

②配制DiR工作液:PBS稀释DiR 储备液;

1:1000 稀释→5μM DiR 工作液1:200稀释→25μM DiR工作液

③药物与工作液混合，室温孵育 20-30min;

④150,000xg 超速离心1.5h，得到DiR-药物;(转速根据药物确定)

⑤干预动物:灌胃/吸入.

⑥成像:10min、30min、1h、6h、12h、24h、48h。(据实验要求设置时间梯度)

附表 DiD，DiO，DiI，DiR和DiA光谱特征汇表

注意事项

（1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

（2）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。