产品简介
台盼蓝(Trypan blue)又锥蓝或锥虫等,是一种阴离子型染料。这种染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色,但死亡细胞的细胞膜通透型增加,可使染料通过细胞膜进入细胞内,使死细胞着色呈蓝色,是最常用的检测细胞活率的方法。通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已死亡,这与中性红作用相反。因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速的区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
台盼蓝是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性。还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成蓝色。台盼蓝可被巨噬细胞吞噬,故可用于巨噬细胞的活体染色剂。台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量,本品主要由台盼蓝/锥虫蓝组成,经过滤除菌处理其中0.4%为最常用的浓度。
使用方法
1. 收集细胞:
用胰酶和/或 EDTA 消化贴壁细胞,悬浮细胞可直接收集。收集细胞时用1000-2000rpm离心1分钟,弃上清,制备单细胞悬液,并做适当稀释。
2. 台盼蓝染色:
细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1比例混匀(终浓度0.04%),染色3分钟 (染色3分钟时间已经足够,但染色时间可以更长一些,但不宜超过10分钟) 。
3. 细胞计数:
吸取少量经过染色的细胞,用血细胞计数板计数。死细胞着蓝色并膨大,无光泽;活细胞不着色并保持正常形态,有光泽。通常要比较精确地进行定量,每个细胞样品至少数500个细胞。
细胞存活率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%
注意事项:
1)染色时间不能太长,否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色,使检测结果偏低。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。