HepG2,Hep G2 人肝癌细胞/人肝母细胞瘤细胞

产品简介

细胞背景： 来源于一名 15 岁的白人少年的肝癌组织。形态为上皮形，模式染色体数为 55，在免疫抑制小鼠中不致瘤。该细胞表达甲胎蛋白、白蛋白、α-2-巨球蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、转铁蛋白、α-1-抗凝乳蛋白酶、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、纤溶酶原、补体 C4、C3 激活物、纤维蛋白原、α-1 酸性糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、β-脂蛋白、视黄醇结合蛋白；表达胰岛素受体和胰岛素样生长因子 IGFⅡ的受体；该细胞具有 3-羟基-3-甲酰辅酶 A 还原酶和肝甘油三酯脂肪酶的活性。目前尚未证明该细胞中有 HBV 基因组。

细胞鉴定： STR 鉴定已通过

细胞来源： 国家资源库

有问题的细胞系：分类错误。最初被认为是肝细胞癌细胞系，但显示其来自肝母细胞瘤细胞

https://www.dsmz.de/collection/catalogue/details/culture/ACC-180

细胞特性 形态：上皮细胞样，贴壁生长

Hep G2 [HepG2] 人肝癌细胞/人肝母细胞瘤细胞和Hep G2+GFP 标记绿色荧光细胞培养方法一致具体培养条件参考一下步骤：

1）准备 MEM（推荐 CAT#FSH066）培养基；优质胎牛血清（推荐 CAT#FS0997），10%；双抗（推荐 CAT#FS0001-3），1%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱湿度为 70%-80%。

【注意事项】

1. hepg2 细胞复苏或传代后会有少部分的细胞贴壁和部分悬浮的细胞，复苏两天后细胞会从贴壁细胞向外开始生长，有时细胞在生长过程中，细胞会在贴壁细胞的上方生长，形成不同的细胞层，这种情况会有发生。 在细胞复苏的一周内，培养瓶中 通常会有悬浮的活的细胞团，在换液过程中不要丢弃在这些活的悬浮细胞，可以通过离心（125×g）回收细胞，重新打回到培养瓶中，分离或者丢弃漂浮的活细胞会使细胞数量变少，引起细胞的停滞生长或细胞死亡。

2.培养条件的细微变化，尤其是 pH 和培养基中血清的质量，可能会影响细胞的生长状况，在细胞的生长过程中会有细胞内的液泡出现，特别在细胞快要融合是会出现这种情况。培养细胞时使用未被灭活的高质量、低内毒素的胎牛血清，可以使细胞更好的贴壁和形成单层细胞。

3. 细胞在生长过程中可以通过将血清浓度提到到 20%来改善细胞生长缓慢的情况。（参考 atcc有关该细胞的描述）

细胞培养：

1）冻存细胞的复苏：

 将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含 4-6mL 完全培养基的离心管中混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含 6-8ml 完全培养基的培养瓶（或皿）中 37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达 70%-90%，即可进行传代培养。

该细胞为轻微贴壁和少量悬浮培养细胞，传代可以参考以下方法：

2-1）. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

由于细胞贴壁不牢 PBS 润洗后细胞会脱落所以 PBS 也要回收到离心管中。

2-2）. 加入 0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL）

置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS 的培养基来终止消化。

3. 将收集到的悬浮细胞、pbs 清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以 1000rpml 离心 5min，弃去上清，补加 1-2mL 培养液后重悬混匀后将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5 的比例进行。

3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面 T25瓶为例；

1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为 1×106~1×107 个活细胞/ml.

2.1000rpm 离心 3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每 1ml 冻存液含 1×10⁶~1×10⁷ 个活细胞/ml 分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3.将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80 度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 运输形式 低温：（1）1mL 冻存管包装干冰运输，收到后-80 度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

常温: （2） T25 瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

生物安全

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。