超敏型ECL化学发光显色试剂盒

产品简介

     辣根过氧化酶使试剂中的发光物（Luminol）氧化并发光，而试剂中含有增强剂这使得发光增强了 1000

倍。在免疫印迹中，将复杂的蛋白混合物经 SDS-PAGE 分离，并转移到固相膜上（如 NC、PVDF）等，用于免疫学检测，经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接（标记一抗）或间接（标记二抗）反应。当加入免疫印迹化学发光试剂后，Luminol 发生氧化降解，并发射波长为 428nm 的光，此光可经 X 光胶片(放射自显影片)感光记录下来。

本试剂是非放射性发光系统，用于检测固定在膜上的蛋白，其敏感性达 1-5fg。用 X 光片可快速地获 得永久的硬拷贝结果。所含独特的底物足以维持 12 小时以上的发光，便于反复曝光操作，免疫印迹膜经抗 体脱卸处理后可供再次抗体探查使用。适用于痕量蛋白或核酸检测。特别节省抗体(一抗 1:500-1:5000， 二抗 1:3000-1:10000)。

产品组成

保存及运输条件: 室温密封避光保存,至少一年有效。

使用方法

1. 印迹膜制备 按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作，适当的封闭非常重要。可以通过标记一抗或二 抗的手段引入HRP，一般采用市售的HRP二抗交联物。仔细地淋洗对于降低背景非常重要，在与HRP 交联物温育后，膜片更需仔细洗涤，所有步骤均在室温下完成。

2.化学发光试剂的配置在使用前等量混合Ⅰ液和Ⅱ液（SolutionⅠ+Solution Ⅱ相同体积），混合后尽快使用。将膜片置混合液中于室温下 振荡温育2分钟，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片。

3.蛋白信号显现

1). 用平头镊钳住膜片，垂直置于吸水纸以吸去过量试剂，置膜片于二层保鲜膜之间，小心赶尽气泡。

2). 将膜片吸附蛋白面朝上，置于 X 光片盒中，于暗室中压上 X 光片。

3).根据信号的强弱适当调整曝光时间，一般1-60s，也可选择不同时间多次压片，以达最佳效果。显影冲洗。

4). 调节曝光时间，再次曝光显影。

4、膜的重复使用： 配置62.5mM Tris-Hcl,PH6.7,2%SDS, 7ml/100ml的巯基乙醇的溶液，膜放入后，70℃振荡水浴30分钟。 再用TBST或PBST缓冲液洗脱，最后用脱脂牛奶封闭。

注意事项

1) 加入一抗后膜不能再干燥；

2) 适当地封闭和洗涤膜片至关重要；

3) 使用前配置化学发光试剂，配置足够覆盖膜片即可，弃去使用过的混合试剂；

4) 使用干净取样头取用每种试剂；

5) 第一张片子建议曝光5s，观察结果后判断最佳曝光时间可1秒至1min不等；

6) 除了放射自显影片曝光和洗片处理外，所有步骤均不必在暗室中操作；

7) 膜片可经适当方法洗脱原有抗体，再次印迹使用，它不像生色物质需要从膜片上清除底物。

8) NaN3能抑制HRP活性，应避免使用NaN3。

9) 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

10) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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